Métodos de conteo de bacterioplancton
El conteo de bacterioplancton es la estimación de la abundancia de bacterioplancton en un cuerpo de agua específico, que es información útil para los microbiólogos marinos. Se han desarrollado varias metodologías de conteo a lo largo de los años para determinar el número presente en el agua que se está observando. Los métodos utilizados para contar el bacterioplancton incluyen microscopía de epifluorescencia , citometría de flujo , medidas de productividad a través de la frecuencia de células en división (FDC), incorporación de timidina e incorporación de leucina .
Factores como la salinidad , la temperatura, la latitud , varios niveles de nutrientes, el movimiento del agua y la presencia de otros organismos pueden afectar la enumeración del bacterioplancton. [1] [2] [3] [4] [5] Los cambios en estos factores afectan el conteo de bacterioplancton, lo que hace que varíe según el cuerpo de agua, la ubicación, la distancia de la costa y la estación. [6] [7] [8]
Para comprender la microbiología marina y el ecosistema acuático, los recuentos de bacterioplancton pueden ser útiles. La observación del número de bacterioplancton puede proporcionar más información en lo siguiente:
La microscopía de epifluorescencia es una técnica avanzada de microscopio óptico que se basa en el uso de tintes fluorescentes que se unen a marcadores biológicos específicos, que luego emiten un espectro de emisión distintivo que se identifica a través de la lente. Los tintes fluorescentes incluyen DAPI , Acridine Orange , SYBR Green 1 y YO-PRO-1, todos los cuales son capaces de teñir estructuras de ADN y ARN en muestras biológicas como bacterias y virus. [18] [19] [20] [21]Sin embargo, la tinción de ADN se utiliza principalmente para la identificación de células bacterianas. Con la microscopía de epifluorescencia moderna, el estándar de la industria para estimar y contar las cantidades de células bacterianas es mediante el uso de una tinción DAPI . [22] Esta técnica se puede realizar para muestras de una amplia gama de entornos y ubicaciones, como agua de mar, varias fuentes de agua dulce, así como suelos y sedimentos. [22]
En un experimento estándar, las muestras bacterianas preparadas se colocan en portaobjetos de conteo y luego se observan con un microscopio de epifluorescencia. La ampliación se establece en un nivel en el que las unidades cuadradas de 0,1 X 0,1 mm en la diapositiva de conteo son claramente visibles. [23] Para cuantificar las bacterias, las células se cuentan en campos de visión de 5 a 30 unidades cuadradas aleatorias y se tabula un recuento promedio de bacterias por campo. [22] Luego, este valor se extrapola para estimar el recuento total de células bacterianas por ml determinando el número total de campos de visión en el área de depósito del portaobjetos y multiplicándolo por el recuento bacteriano promedio por unidad de recuento. [23]
Para enumerar las cantidades de células bacterianas, solo se cuentan físicamente pequeñas porciones de bacterias en una muestra por razones logísticas, sobre las cuales se estiman las abundancias totales por extrapolación. Los valores medios se utilizan luego para la comparación entre muestras. Sin embargo, se ha cuestionado la precisión de esta técnica, en la que se utiliza la tabulación de solo un pequeño subconjunto para estimar las cantidades de abundancia total. [22] Principalmente, se ha demostrado que la distribución de las células bacterianas en los portaobjetos de recuento puede ser desigual e inconsistente. [22] Además, para obtener una estimación legítima de los recuentos bacterianos mediante el uso de esta técnica, se ha sugerido que se deben medir más de 350 células individuales, de 20 campos de visión. [22] Esto puede llevar no solo mucho tiempo, sino también ser difícil de lograr en ciertas muestras.
