Las pruebas de compatibilidad sanguínea se realizan en un laboratorio médico para identificar posibles incompatibilidades entre los tipos de sangre en las transfusiones de sangre . También se usa para diagnosticar y prevenir algunas complicaciones del embarazo que pueden ocurrir cuando el bebé tiene un grupo sanguíneo diferente al de la madre. Las pruebas de compatibilidad sanguínea incluyen el tipo de sangre , que detecta los antígenos en los glóbulos rojos que determinan el tipo de sangre de una persona; pruebas de anticuerpos inesperados contra antígenos de grupos sanguíneos ( detección e identificación de anticuerpos ); y, en el caso de las transfusiones de sangre, mezclar losplasma con los glóbulos rojos del donante para detectar incompatibilidades (compatibilidad cruzada ). La tipificación sanguínea de rutina implica determinar el tipo ABO y RhD (factor Rh), [nota 1] e implica tanto la identificación de antígenos ABO en los glóbulos rojos (agrupación directa) como la identificación de anticuerpos ABO en el plasma (agrupación inversa). Se pueden analizar otros antígenos de grupos sanguíneos en situaciones clínicas específicas.
Prueba de compatibilidad sanguínea | |
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Propósito | Identificación de incompatibilidades entre grupos sanguíneos |
Prueba de | Glóbulos rojos ; plasma sanguíneo |
MedlinePlus | 003345 |
eMedicina | 1731198 |
LOINC | 34532-2 , 883–9 , 10331-7 |
Las pruebas de compatibilidad sanguínea utilizan reacciones entre los antígenos y los anticuerpos del grupo sanguíneo, específicamente la capacidad de los anticuerpos para hacer que los glóbulos rojos se agrupen cuando se unen a los antígenos en la superficie celular, un fenómeno llamado aglutinación . Las técnicas que se basan en reacciones antígeno-anticuerpo se denominan métodos serológicos , y hay varios de esos métodos disponibles, que van desde pruebas manuales con tubos de ensayo o portaobjetos hasta sistemas totalmente automatizados. Los tipos de sangre también se pueden determinar mediante pruebas genéticas , que se utilizan cuando existen condiciones que interfieren con las pruebas serológicas o cuando se requiere un alto grado de precisión en la identificación de antígenos.
Varias condiciones pueden causar resultados falsos o no concluyentes en las pruebas de compatibilidad sanguínea. Cuando estos problemas afectan la tipificación ABO, se denominan discrepancias ABO . Las discrepancias ABO deben investigarse y resolverse antes de informar el tipo de sangre de la persona. Otras fuentes de error incluyen el fenómeno de " D débil ", en el que las personas que dan positivo al antígeno RhD muestran reacciones débiles o negativas cuando se les hace la prueba de RhD, y la presencia de anticuerpos de inmunoglobulina G en los glóbulos rojos, que pueden interferir con la detección de anticuerpos. , compatibilidad cruzada y tipificación de algunos antígenos de grupos sanguíneos.
Usos médicos
Las pruebas de compatibilidad sanguínea se realizan de forma rutinaria antes de una transfusión de sangre . El proceso de prueba de compatibilidad completo implica la tipificación ABO y RhD (factor Rh); cribado de anticuerpos contra otros sistemas de grupos sanguíneos ; y compatibilidad cruzada , que implica analizar el plasma sanguíneo del receptor con los glóbulos rojos del donante como comprobación final de incompatibilidad. Si se detecta un anticuerpo de grupo sanguíneo inesperado, se justifican más pruebas para identificar el anticuerpo [3] : 740 y asegurarse de que la sangre del donante sea negativa para el antígeno relevante. [1] : 261 Se puede omitir la compatibilidad cruzada serológica si la prueba de detección de anticuerpos del receptor es negativa, no hay antecedentes de anticuerpos clínicamente significativos y su tipo ABO / Rh se ha confirmado con los registros históricos o con una segunda muestra de sangre; y en casos de emergencia, se puede transfundir sangre antes de que los resultados de las pruebas de compatibilidad estén disponibles. [1] : 262–3
Las pruebas de compatibilidad sanguínea se realizan a menudo en mujeres embarazadas y en la sangre del cordón umbilical de bebés recién nacidos, porque la incompatibilidad pone al bebé en riesgo de desarrollar una enfermedad hemolítica del recién nacido. [4] [5] También se usa antes del trasplante de células madre hematopoyéticas , porque la incompatibilidad del grupo sanguíneo puede ser responsable de algunos casos de enfermedad injerto contra huésped aguda . [6]
Principios
Los tipos de sangre se definen según la presencia o ausencia de ciertos antígenos en la superficie de los glóbulos rojos. Los más importantes de estos en medicina son los antígenos ABO y RhD [7] : 585 pero existen muchos otros sistemas de grupos sanguíneos y son clínicamente relevantes en determinadas situaciones. A partir de 2021, se reconocen oficialmente 41 grupos sanguíneos. [8]
Las personas que carecen de ciertos antígenos de grupos sanguíneos en sus glóbulos rojos pueden formar anticuerpos contra estos antígenos. Por ejemplo, una persona con sangre tipo A producirá anticuerpos contra el antígeno B. Los anticuerpos del grupo sanguíneo ABO se producen de forma natural, lo que significa que se encuentran en personas que no han estado expuestas a sangre incompatible. [7] : 585–92 Los anticuerpos contra la mayoría de los otros antígenos de grupos sanguíneos, incluido el RhD, se desarrollan después de que las personas se exponen a los antígenos a través de una transfusión o el embarazo. [1] : 62 Algunos de estos anticuerpos pueden unirse a glóbulos rojos incompatibles y hacer que se destruyan , lo que resulta en reacciones transfusionales y otras complicaciones. [9] : 210-11
Los métodos serológicos para las pruebas de compatibilidad sanguínea utilizan estas reacciones anticuerpo-antígeno . En la tipificación sanguínea, los reactivos que contienen anticuerpos del grupo sanguíneo, llamados antisueros , [7] : 586 se agregan a las suspensiones de células sanguíneas. Si el antígeno relevante está presente, los anticuerpos en el reactivo harán que los glóbulos rojos se aglutinen (se agrupen), que pueden identificarse visualmente. [1] : 65 En el cribado de anticuerpos, el plasma del individuo se analiza frente a un conjunto de glóbulos rojos con perfiles antigénicos conocidos; si el plasma aglutina uno de los glóbulos rojos en el panel, esto indica que el individuo tiene un anticuerpo contra uno de los antígenos presentes en las células. En la compatibilidad cruzada, se agrega el plasma de un posible receptor de transfusión a los glóbulos rojos del donante y se observa la aglutinación (o hemólisis) para detectar anticuerpos que podrían causar reacciones transfusionales. [3] : 722–5
Los anticuerpos del grupo sanguíneo se presentan en dos formas principales: inmunoglobulina M (IgM) e inmunoglobulina G (IgG). Los anticuerpos que son predominantemente IgM, como los anticuerpos ABO, generalmente causan una aglutinación inmediata de los glóbulos rojos a temperatura ambiente. Por lo tanto, el tipo de sangre ABO de una persona se puede determinar simplemente agregando los glóbulos rojos al reactivo y centrifugando o mezclando la muestra, [1] : 122 y en el cruce, la incompatibilidad entre los tipos ABO se puede detectar inmediatamente después de la centrifugación. [3] : 725 La tipificación de RhD también suele utilizar reactivos IgM [10] : 477 aunque el anti-RhD suele aparecer como IgG en el cuerpo. [1] : 161 Los anticuerpos que son predominantemente IgG, como los dirigidos contra los antígenos de los sistemas Duffy y Kidd , [1] : 198-200 generalmente no causan aglutinación inmediata porque el pequeño tamaño del anticuerpo IgG previene la formación de una red. estructura. Por lo tanto, la tipificación sanguínea usando antisueros IgG y la detección de anticuerpos IgG requiere el uso de la prueba de antiglobulina indirecta para demostrar que la IgG se une a los glóbulos rojos. [1] : 104
En la prueba de antiglobulina indirecta, la mezcla de antisuero o plasma y glóbulos rojos se incuba a 37 ° C (99 ° F), la temperatura ideal para la reactividad de los anticuerpos IgG. Después de la incubación, los glóbulos rojos se lavan con solución salina para eliminar los anticuerpos no unidos y se agrega el reactivo de globulina antihumana. Si los anticuerpos IgG se han unido a antígenos en la superficie celular, la globulina antihumana se unirá a esos anticuerpos, lo que hará que los glóbulos rojos se aglutinen después de la centrifugación. Si la reacción es negativa, se agregan "células de verificación", es decir, células reactivas recubiertas con IgG, para garantizar que la prueba esté funcionando correctamente. Si el resultado de la prueba es realmente negativo, las células de control deben reaccionar con la globulina antihumana no unida y demostrar aglutinación. [3] : 716–9
Tipificación de sangre
Tipificación ABO y Rh
En la tipificación ABO y Rh, se añaden reactivos que contienen anticuerpos contra los antígenos A, B y RhD a las suspensiones de células sanguíneas. Si el antígeno relevante está presente, los anticuerpos en el reactivo harán que los glóbulos rojos se aglutinen (se agrupen), que pueden identificarse visualmente. [1] : 65 Además de identificar los antígenos ABO, que se denomina agrupamiento directo, la tipificación sanguínea ABO de rutina también incluye la identificación de los anticuerpos ABO en el plasma de la persona. Esto se llama agrupación inversa, [1] : 120 y se hace para confirmar el tipo de sangre ABO. En el agrupamiento inverso, el plasma de la persona se agrega a los glóbulos rojos tipo A 1 y tipo B. El plasma debe aglutinar las células que expresan los antígenos de los que carece la persona, sin aglutinar las células que expresan los mismos antígenos que el paciente. Si esto no ocurre, se requieren más pruebas. [7] : 595 La aglutinación se puntúa de 1+ a 4+ en función de la fuerza de la reacción. En la tipificación ABO, una puntuación de 3+ o 4+ indica una reacción positiva, mientras que una puntuación de 1+ o 2+ no es concluyente y requiere más investigación. [1] : 236
Otros sistemas de grupos sanguíneos
Antes de recibir una transfusión de sangre, los individuos se examinan para detectar la presencia de anticuerpos contra antígenos de sistemas de grupos sanguíneos no ABO . [5] Los antígenos de los grupos sanguíneos además de ABO y RhD que son importantes en la medicina transfusional incluyen los antígenos RhC / cy E / e y los antígenos de los sistemas Duffy , Kell , Kidd y MNS . [1] : 158-173 Si se identifica un anticuerpo clínicamente significativo, el receptor debe recibir una transfusión de sangre que sea negativa para el antígeno correspondiente para evitar una reacción a la transfusión. Esto requiere que las unidades donantes se tipifiquen para el antígeno relevante. [1] : 261 El receptor también puede ser tipificado para el antígeno para confirmar la identidad del anticuerpo, ya que solo los individuos que son negativos para un antígeno de grupo sanguíneo deben producir anticuerpos contra él. [7] : 603
En Europa, las mujeres que requieren transfusiones de sangre a menudo se tipifican para los antígenos Kell y Rh extendido para prevenir la sensibilización a estos antígenos, lo que podría ponerlas en riesgo de desarrollar enfermedad hemolítica del recién nacido durante el embarazo. [11] La Sociedad Estadounidense de Hematología recomienda que las personas con anemia de células falciformes se sometan a un análisis del tipo de sangre para los antígenos RhC / c, RhE / e, Kell, Duffy, Kidd y MNS antes de la transfusión, [12] : 130-1 porque a menudo requieren transfusiones y pueden sensibilizarse a estos antígenos si se transfunden con sangre no coincidente. [13] También se recomienda el fenotipado extendido de glóbulos rojos para personas con beta-talasemia . [14] Los sistemas de grupos sanguíneos distintos de ABO y Rh tienen un riesgo relativamente pequeño de complicaciones cuando la sangre se mezcla, por lo que en emergencias como una hemorragia importante , la urgencia de la transfusión puede exceder la necesidad de pruebas de compatibilidad con otros sistemas de grupos sanguíneos (y potencialmente Rh también). [15]
Detección e identificación de anticuerpos
Los anticuerpos contra la mayoría de los antígenos de los grupos sanguíneos, además de los del sistema ABO, se desarrollan después de la exposición a sangre incompatible. [1] : 62 Estos anticuerpos de grupo sanguíneo "inesperados" solo se encuentran en el 0,8–2% de las personas; sin embargo, los receptores de transfusiones de sangre deben someterse a pruebas de detección de estos anticuerpos para prevenir reacciones a las transfusiones. La detección de anticuerpos también se realiza como parte de la atención prenatal , porque los anticuerpos contra RhD y otros antígenos de grupos sanguíneos pueden causar enfermedad hemolítica en el recién nacido, y porque las madres Rh negativas que han desarrollado un anticuerpo anti-RhD no son elegibles para recibir Rho (D ) inmunoglobulina (Rhogam). [1] : 233
En el procedimiento de selección de anticuerpos, el plasma de un individuo se añade a un panel de dos o tres conjuntos de glóbulos rojos que se han elegido para expresar los antígenos de grupos sanguíneos más significativos desde el punto de vista clínico. En la selección de anticuerpos solo se utilizan células del grupo O, ya que de lo contrario las células reaccionarían con los anticuerpos del grupo sanguíneo ABO que se encuentran de forma natural. La mezcla de plasma y glóbulos rojos se incuba a 37 ° C y se analiza mediante la prueba de antiglobulina indirecta. Algunos protocolos de detección e identificación de anticuerpos incorporan una fase de prueba después de la incubación a temperatura ambiente, pero esto a menudo se omite porque la mayoría de los anticuerpos inesperados que reaccionan a temperatura ambiente son clínicamente insignificantes. [3] : 722–4
La aglutinación de las células de cribado por el plasma, con o sin la adición de globulina antihumana, indica que está presente un anticuerpo de grupo sanguíneo inesperado. Si esto ocurre, es necesario realizar más pruebas con más células (por lo general, 10-11) para identificar el anticuerpo. Al examinar los perfiles antigénicos de los glóbulos rojos con los que reacciona el plasma de la persona, es posible determinar la identidad del anticuerpo. Se incluye un "autocontrol", en el que el plasma del individuo se prueba contra sus propios glóbulos rojos, para determinar si la aglutinación se debe a un aloanticuerpo (un anticuerpo contra un antígeno extraño), un autoanticuerpo (un anticuerpo contra los propios antígenos), u otra sustancia interferente. [3] : 722–4
La imagen de arriba muestra la interpretación de un panel de anticuerpos utilizado en serología para detectar anticuerpos contra los antígenos de los grupos sanguíneos más relevantes. Cada fila representa glóbulos rojos de "referencia" o "control" de donantes que tienen composiciones antigénicas conocidas y son del grupo O ABO . A + significa que el antígeno está presente en los glóbulos rojos de referencia y 0 significa que está ausente; nt significa "no probado". La columna "resultado" de la derecha muestra la reactividad al mezclar glóbulos rojos de referencia con plasma del paciente en 3 fases diferentes: temperatura ambiente, 37 ° C y AHG (con globulina antihumana, por la prueba de antiglobulina indirecta ). [dieciséis]
- Paso 1 ; Anotado en azul: comenzando a excluir antígenos sin reacción en las 3 fases; mirando la primera fila de celdas de referencia sin reacción (0 en la columna de la derecha, en este caso el donante de células 2), y excluyendo (aquí marcado con X) cada antígeno presente donde el otro par es prácticamente inexistente (como para D) o 0 (la presencia es homocigótica, en este caso homocigótica c).
Cuando ambos pares son + (casos heterocigotos), ambos se excluyen (aquí marcados con una X), excepto para los antígenos C / c, E / e, Duffy, Kidd y MNS (donde los anticuerpos del paciente aún pueden reaccionar hacia las células sanguíneas con expresión de antígeno homocigoto, porque la expresión homocigótica da como resultado una dosis más alta del antígeno). [17] Por lo tanto, en este caso, E / e no se excluye en esta fila, mientras que K / k lo es, así como Js b (independientemente de lo que Js a hubiera mostrado). [nota 2] - Paso 2 : Anotado en marrón: Pasar a la siguiente fila de células de referencia con una reacción negativa (en este caso, el donante de células 4) y repetir para cada tipo de antígeno que aún no esté excluido.
- Paso 3 : anotado en morado. Repitiendo lo mismo para cada fila de celda de referencia con reacción negativa.
- Paso 4 : Descontar los antígenos que estaban ausentes en todos o casi todos los casos reactivos (aquí marcados con \). A menudo se trata de antígenos con baja prevalencia y, si bien existe la posibilidad de que se produzcan tales anticuerpos, generalmente no son del tipo responsable de la reactividad en cuestión.
- Paso 5 : comparar los posibles antígenos restantes para un culpable más probable (en este caso Fy a ) y descartar selectivamente antígenos diferenciales significativos, como con el tipo de célula donante adicional que se muestra que se sabe que no contiene Fy a pero contiene C y Jk a .
En este caso, el panel de anticuerpos muestra la presencia de anticuerpos anti-Fy a . Esto indica que se debe usar sangre de un donante con un tipo negativo para el antígeno Fy a . Aún así, si una prueba cruzada posterior muestra reactividad, se deben realizar pruebas adicionales contra antígenos previamente descontados (en este caso potencialmente E, K, Kp a y / o Lu a ). [16] Es posible que las personas que hayan dado positivo por un anticuerpo de grupo sanguíneo inesperado en el pasado no muestren una reacción positiva en las pruebas posteriores; sin embargo, si el anticuerpo es clínicamente significativo, se deben transfundir con sangre antígeno negativa independientemente. [18]
Sustancia neutralizante | Antígeno cancelado |
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| P1 |
Saliva | H, Le a |
La leche materna | I |
Orina de conejillo de indias | Sda |
Cuando están presentes múltiples anticuerpos, o cuando un anticuerpo se dirige contra un antígeno de alta frecuencia, el procedimiento normal del panel de anticuerpos puede no proporcionar una identificación concluyente. En estos casos, se puede utilizar la inhibición de la hemaglutinación , en la que una sustancia neutralizante anula un antígeno específico. [17] Alternativamente, el plasma se puede incubar con células de perfiles antigénicos conocidos para eliminar un anticuerpo específico (un proceso denominado adsorción ); o las células pueden tratarse con enzimas como ficaína o papaína que inhiben la reactividad de algunos anticuerpos de grupos sanguíneos y potencian otros. [3] : 723–9 El efecto de la ficaína y la papaína en los principales sistemas de grupos sanguíneos es el siguiente: [19] [20]
- Mejorado: ABO , Rh , Kidd , Lewis , P1 , Ii
- Destruidos: Duffy (Fy una y Fy b ), Lutheran , MNS
- No afectado: Kell
Pruebas cruzadas
La compatibilidad cruzada, que se realiza de forma rutinaria antes de una transfusión de sangre, implica agregar el plasma sanguíneo del receptor a una muestra de glóbulos rojos del donante. Si la sangre es incompatible, los anticuerpos del plasma del receptor se unirán a los antígenos de los glóbulos rojos del donante. Esta reacción anticuerpo-antígeno puede detectarse por aglutinación visible o destrucción de los glóbulos rojos, o por reacción con anti-globulina humana , después de la centrifugación. [7] : 600–3
Si el receptor de la transfusión tiene un cribado de anticuerpos negativo y no tiene antecedentes de anticuerpos, a menudo se realiza una prueba cruzada de "giro inmediato": los glóbulos rojos y el plasma se centrifugan inmediatamente después de la mezcla como verificación final de incompatibilidad entre los tipos sanguíneos ABO. Si se detecta un anticuerpo clínicamente significativo (o lo estaba en el pasado), o si la prueba cruzada de giro inmediata demuestra incompatibilidad, se realiza una prueba cruzada "completa" o "de IgG", que utiliza la prueba de antiglobulina indirecta para detectar la incompatibilidad de grupos sanguíneos causada por IgG anticuerpos. El procedimiento de compatibilidad cruzada de IgG es más largo que el cruce de rotación inmediata y, en algunos casos, puede llevar más de dos horas. [18]
Las personas que tienen una prueba de detección de anticuerpos negativa y no tienen antecedentes de anticuerpos también pueden someterse a una "prueba cruzada electrónica", siempre que su tipo ABO y Rh se haya determinado a partir de la muestra de sangre actual y que se registren los resultados de otro tipo ABO / Rh. En este caso, el tipo de sangre del receptor simplemente se compara con el de la sangre del donante, sin necesidad de pruebas serológicas. [7] : 600–3 En emergencias, se puede emitir sangre antes de que se complete la prueba cruzada . [1] : 262–3
Métodos
Métodos de tubo y portaobjetos
La tipificación sanguínea se puede realizar utilizando tubos de ensayo, microplacas o portaobjetos de tipificación sanguínea. El método del tubo implica mezclar una suspensión de glóbulos rojos con antisueros (o plasma, para agrupamiento inverso) en un tubo de ensayo. La mezcla se centrifuga para separar las células del reactivo y luego se resuspende agitando suavemente el tubo. Si el antígeno de interés está presente, los glóbulos rojos se aglutinan y forman un grupo sólido en el tubo. Si está ausente, los glóbulos rojos vuelven a la suspensión cuando se mezclan. [7] : 611–12 [9] : 214 El método de microplaca es similar al método de tubo, excepto que en lugar de usar tubos de ensayo individuales, la determinación del grupo sanguíneo se lleva a cabo en una placa que contiene docenas de pocillos, lo que permite realizar múltiples pruebas en al mismo tiempo. Las reacciones de aglutinación se leen después de centrifugar la placa. [21] : 201
El cribado e identificación de anticuerpos también se puede llevar a cabo mediante el método del tubo. En este procedimiento, el plasma y los glóbulos rojos se mezclan en un tubo que contiene un medio que mejora las reacciones de aglutinación, como la solución salina de baja fuerza iónica (LISS). Los tubos se incuban a temperatura corporal durante un período de tiempo definido, luego se centrifugan y se examinan en busca de aglutinación o hemólisis; primero inmediatamente después del período de incubación, y luego después del lavado y la adición de reactivo de globulina antihumana. [3] : 722 El emparejamiento cruzado, igualmente, se puede realizar mediante el método del tubo; las reacciones se leen inmediatamente después de la centrifugación en el cruce de giro inmediato, o después de la incubación y la adición de AHG en el procedimiento de cruce completo. [3] : 725
El método de portaobjetos para la tipificación de sangre implica mezclar una gota de sangre con una gota de antisuero en un portaobjetos. El portaobjetos se inclina para mezclar las células y los reactivos y luego se observa la aglutinación, lo que indica un resultado positivo. Este método se usa típicamente en áreas de escasos recursos o situaciones de emergencia; de lo contrario, se prefieren métodos alternativos. [9] : 214 [10] : 476
Aglutinación de columna
Las técnicas de aglutinación de columnas para las pruebas de compatibilidad sanguínea (a veces llamadas "prueba de gel") utilizan tarjetas que contienen columnas de gel de dextrano - poliacrilamida . Las tarjetas diseñadas para la tipificación sanguínea contienen reactivos de tipificación sanguínea predispensados para el agrupamiento directo y pocillos que contienen solo una solución tampón , a la que se agregan los glóbulos rojos reactivos y el plasma, para el agrupamiento inverso. El cribado y el emparejamiento cruzado de anticuerpos también se pueden llevar a cabo mediante aglutinación en columna, en cuyo caso se utilizan tarjetas que contienen reactivo anti-globulina humana. Las tarjetas de gel se centrifugan (a veces después de la incubación, según la prueba), durante el cual los aglutinados de glóbulos rojos quedan atrapados en la parte superior de la columna porque son demasiado grandes para migrar a través del gel. Las células que no se han aglutinado se acumulan en el fondo. Por lo tanto, una línea de glóbulos rojos en la parte superior de la columna indica un resultado positivo. La fuerza de las reacciones positivas se puntúa de 1+ a 4+ dependiendo de qué tan lejos hayan viajado las células a través del gel. La prueba de gel tiene ventajas sobre los métodos manuales en que elimina la variabilidad asociada con la resuspensión manual de las células y que las tarjetas se pueden mantener como un registro de la prueba. [1] : 269–71 Algunos analizadores automáticos utilizan el método de aglutinación en columna para realizar la tipificación sanguínea automáticamente. [7] : 590 Estos analizadores pipetean glóbulos rojos y plasma en tarjetas de gel, los centrifugan y escanean y leen las reacciones de aglutinación para determinar el tipo de sangre. [1] : 270–1
Ensayo en fase sólida
Los ensayos en fase sólida (a veces denominados método de "captura de antígeno") utilizan antígenos reactivos o anticuerpos adheridos a una superficie (generalmente una microplaca). [9] : 214 pocillos de microplacas recubiertos con reactivos anti-A, -B y -D se utilizan para agrupamiento directo. Se agrega la muestra de prueba y se centrifuga la microplaca; en una reacción positiva, los glóbulos rojos se adhieren a la superficie del pozo. [7] : 590 [10] : 477 Algunos analizadores automáticos utilizan ensayos en fase sólida para la tipificación sanguínea. [1] : 275–6
Genotipado
Las pruebas genéticas se pueden utilizar para determinar el tipo de sangre de una persona en determinadas situaciones en las que las pruebas serológicas son insuficientes. Por ejemplo, si una persona ha recibido una transfusión de grandes volúmenes de sangre de un donante, los resultados de las pruebas serológicas reflejarán los antígenos de las células del donante y no el tipo de sangre real de la persona. [11] Los individuos que producen anticuerpos contra sus propios glóbulos rojos [21] : 202 o que son tratados con ciertos medicamentos pueden mostrar reacciones de aglutinación falsas en las pruebas serológicas, por lo que puede ser necesario el genotipado para determinar su tipo de sangre con precisión. [1] : 261 Se requieren pruebas genéticas para tipificar antígenos de glóbulos rojos para los que no se dispone de antisueros comerciales. [11]
La AABB recomienda el genotipado del antígeno RhD para mujeres con fenotipos D serológicos débiles que tienen el potencial de tener hijos. Esto se debe a que algunas personas con fenotipos D débiles pueden producir anticuerpos contra el antígeno RhD, que puede causar la enfermedad hemolítica del recién nacido, mientras que otras no. La genotipificación puede identificar el tipo específico de antígeno D débil, que determina la posibilidad de que la persona produzca anticuerpos, evitando así un tratamiento innecesario con inmunoglobulina Rho (D) . [22] [23] Se prefiere la genotipificación a las pruebas serológicas para personas con anemia de células falciformes, porque es más precisa para ciertos antígenos y puede identificar antígenos que no pueden detectarse mediante métodos serológicos. [13]
La genotipificación también se utiliza en las pruebas prenatales de la enfermedad hemolítica del recién nacido. Cuando una mujer embarazada tiene un grupo sanguíneo de anticuerpos que puede causar HDN, el feto se puede tipificar para el antígeno relevante para determinar si está en riesgo de desarrollar la enfermedad. Debido a que no es práctico extraer sangre del feto, el tipo de sangre se determina usando una muestra de amniocentesis o ADN fetal libre de células aislado de la sangre de la madre. [21] : 202 [22] El padre también puede ser genotipado para predecir el riesgo de enfermedad hemolítica del recién nacido, porque si el padre es homocigoto para el antígeno relevante (es decir, tiene dos copias del gen), el bebé será positivo para antígeno y, por tanto, en riesgo de desarrollar la enfermedad. Si el padre es heterocigoto (solo tiene una copia), el bebé solo tiene un 50% de probabilidades de ser positivo para el antígeno. [11]
Limitaciones
Discrepancias ABO
En la tipificación ABO, los resultados de la agrupación directa e inversa siempre deben corresponder entre sí. Una diferencia inesperada entre los dos resultados se denomina discrepancia ABO y debe resolverse antes de que se informe el tipo de sangre de la persona. [1] : 136
Agrupación directa
Las reacciones débiles en el agrupamiento directo pueden ocurrir en personas que pertenecen a ciertos subgrupos ABO: tipos de sangre variantes caracterizados por una expresión disminuida de los antígenos A o B o cambios en su estructura. La expresión debilitada de los antígenos ABO también puede ocurrir en la leucemia y el linfoma de Hodgkin . Las reacciones débiles en el agrupamiento directo se pueden fortalecer incubando la mezcla de sangre y reactivo a temperatura ambiente o 4 ° C (39 ° F), o usando ciertas enzimas para mejorar las reacciones antígeno-anticuerpo. [1] : 139
Ocasionalmente, dos poblaciones de glóbulos rojos son evidentes después de la reacción con los antisueros de tipificación sanguínea. Algunos de los glóbulos rojos están aglutinados, mientras que otros no, lo que dificulta la interpretación del resultado. Esto se denomina reacción de campo mixto y puede ocurrir si alguien ha recibido recientemente una transfusión de sangre con un tipo de sangre diferente (como en un paciente de tipo A que recibe sangre de tipo O), si ha recibido un trasplante de médula ósea o de células madre de alguien con un tipo de sangre diferente, o en pacientes con ciertos subgrupos ABO, como A 3 . La investigación del historial médico de la persona puede aclarar la causa de la reacción de campo mixto. [1] : 138 [24] : 314
Las personas con enfermedad por crioaglutininas producen anticuerpos contra sus propios glóbulos rojos que hacen que se aglutinen espontáneamente a temperatura ambiente, lo que da lugar a reacciones falsas positivas en el agrupamiento directo. Las aglutininas frías generalmente se pueden desactivar calentando la muestra a 37 ° C (99 ° F) y lavando los glóbulos rojos con solución salina. Si esto no es efectivo, se puede usar ditiotreitol para destruir los anticuerpos. [1] : 141
Las muestras de sangre del cordón umbilical pueden estar contaminadas con la gelatina de Wharton , una sustancia viscosa que puede hacer que los glóbulos rojos se peguen, imitando la aglutinación. La gelatina de Wharton se puede eliminar lavando a fondo los glóbulos rojos. [1] : 141
En un fenómeno poco común conocido como "antígeno B adquirido", un paciente cuyo verdadero tipo de sangre es A puede mostrar un resultado positivo débil para B en el grupo de avance. Esta condición, que se asocia con enfermedades gastrointestinales como el cáncer de colon [1] : 139 y la obstrucción intestinal , [24] : 126 resulta de la conversión del antígeno A en una estructura que imita el antígeno B por las enzimas bacterianas. [10] : 477 A diferencia del verdadero antígeno B, el antígeno B adquirido no reacciona con reactivos dentro de un cierto rango de pH. [1] : 139
Agrupación inversa
Los bebés menores de 3 a 6 meses de edad presentan reacciones débiles o faltantes en el agrupamiento inverso porque producen niveles muy bajos de anticuerpos ABO. [1] : 136 Por lo tanto, la agrupación inversa generalmente no se realiza para este grupo de edad. [10] : 486 Las personas de edad avanzada también pueden presentar una disminución de la producción de anticuerpos, al igual que las personas con hipogammaglobulinemia . Las reacciones débiles se pueden fortalecer permitiendo que el plasma y los glóbulos rojos se incuben a temperatura ambiente durante 15 a 30 minutos, y si esto no es efectivo, se pueden incubar a 4 ° C (39 ° F). [1] : 137–8
Aproximadamente el 20% de los individuos con el tipo de sangre A o AB pertenecen a un subgrupo de A, denominado un 2 , mientras que el subgrupo más común, que abarca aproximadamente el 80% de los individuos, que se denomina un 1 . Debido a las pequeñas diferencias en la estructura de los antígenos A 1 y A 2 , algunos individuos del subgrupo A 2 pueden producir un anticuerpo contra A 1 . Por lo tanto, estos individuos escribirán como A o AB en la agrupación directa, pero mostrarán una reacción positiva inesperada con los glóbulos rojos de tipo A 1 en la agrupación inversa. La discrepancia se puede resolver analizando los glóbulos rojos de la persona con un reactivo anti-A 1 , que dará un resultado negativo si el paciente pertenece al subgrupo A 2 . Los anticuerpos anti-A 1 se consideran clínicamente insignificantes a menos que reaccionen a 37 ° C (99 ° F). Existen otros subgrupos de A, así como subgrupos de B, pero rara vez se encuentran. [1] : 127–32
Si hay altos niveles de proteína en el plasma de una persona, puede ocurrir un fenómeno conocido como rouleaux cuando su plasma se agrega a las células reactivas. Rouleaux hace que los glóbulos rojos se apilen, lo que puede imitar la aglutinación, provocando un resultado falso positivo en el agrupamiento inverso. Esto se puede evitar retirando el plasma, reemplazándolo con solución salina y volviendo a centrifugar el tubo. Rouleaux desaparecerá una vez que el plasma se reemplace con solución salina, pero la verdadera aglutinación persistirá. [1] : 140–1
Los anticuerpos contra los antígenos de los grupos sanguíneos distintos de A y B pueden reaccionar con las células reactivas utilizadas en el agrupamiento inverso. Si hay un autoanticuerpo que reacciona en frío , el resultado falso positivo se puede resolver calentando la muestra a 37 ° C (99 ° F). Si el resultado es causado por un aloanticuerpo, se puede realizar un cribado de anticuerpos para identificar el anticuerpo, [7] : 141-2 y se puede realizar el agrupamiento inverso utilizando muestras que carecen del antígeno relevante. [10] : 477
Fenotipo D débil
Aproximadamente del 0,2 al 1% de las personas tienen un fenotipo "D débil", [25] lo que significa que son positivas para el antígeno RhD, pero presentan reacciones débiles o negativas con algunos reactivos anti-RhD debido a la disminución de la expresión del antígeno o variantes atípicas del antígeno. estructura. Si las pruebas serológicas de rutina para RhD dan como resultado una puntuación de 2+ o menos, se puede usar la prueba de antiglobulina para demostrar la presencia de RhD. [1] : 159 La prueba D débil también se realiza en donantes de sangre que inicialmente son RhD negativos. [22] Históricamente, los donantes de sangre con D débil fueron tratados como Rh positivos y los pacientes con D débil fueron tratados como Rh negativos para evitar una posible exposición a sangre incompatible. El genotipado se utiliza cada vez más para determinar la base molecular de los fenotipos D débiles, ya que esto determina si los individuos con D débil pueden producir anticuerpos contra RhD o sensibilizar a otros al antígeno RhD. [25]
Sensibilización de anticuerpos de glóbulos rojos
La prueba de antiglobulina indirecta , que se utiliza para la prueba D débil y la tipificación de algunos antígenos de los glóbulos rojos, detecta la IgG unida a los glóbulos rojos. Si la IgG se une a los glóbulos rojos in vivo , como puede ocurrir en la anemia hemolítica autoinmune , la enfermedad hemolítica del recién nacido y las reacciones transfusionales, [10] : 260 la prueba de antiglobulina indirecta siempre dará un resultado positivo, independientemente de la presencia de la antígeno relevante. [10] : 477–8 Se puede realizar una prueba de antiglobulina directa para demostrar que la reacción positiva se debe a la sensibilización de los glóbulos rojos. [26] : 289
Otras pruebas previas a la transfusión
Algunos grupos de personas tienen necesidades de transfusión especializadas. Los fetos, los lactantes de muy bajo peso al nacer y las personas inmunodeprimidas corren el riesgo de desarrollar una infección grave por citomegalovirus (CMV), un patógeno oportunista para el que aproximadamente el 50% de los donantes de sangre dan positivo, y se pueden transfundir con sangre CMV negativa para prevenir infección. [3] : 749 [27] Aquellos que están en riesgo de desarrollar enfermedad de injerto contra huésped , como los receptores de un trasplante de médula ósea , reciben sangre que ha sido irradiada para inactivar los linfocitos T responsables de esta reacción. Las personas que han tenido reacciones alérgicas graves a las transfusiones de sangre en el pasado pueden recibir una transfusión de sangre que ha sido "lavada" para eliminar el plasma. [1] : 342–5 También se examina la historia del paciente para ver si ha identificado previamente anticuerpos y cualquier otra anomalía serológica.
También se realiza una prueba de antiglobulina directa (prueba de Coombs ) como parte de la investigación de anticuerpos. [28]
La sangre de los donantes generalmente se analiza para detectar infecciones transmitidas por transfusiones , como el VIH . En 2018, la Organización Mundial de la Salud informó que casi el 100% de las donaciones de sangre en países de ingresos altos y medianos altos se sometieron a exámenes de detección de enfermedades infecciosas, pero las cifras para los países de ingresos medianos bajos y bajos fueron 82% y 80.3 % respectivamente. [29]
Historia
En 1901, Karl Landsteiner publicó los resultados de un experimento en el que mezcló el suero y los glóbulos rojos de cinco donantes humanos diferentes. Observó que el suero de una persona nunca aglutinaba sus propios glóbulos rojos, pero podía aglutinar los de otros y, en función de las reacciones de aglutinación, los glóbulos rojos podían clasificarse en tres grupos: grupo A, grupo B y grupo C. Grupo C, que consistía en glóbulos rojos que no reaccionaban con el plasma de ninguna persona, más tarde se conocería como grupo O. [30] : 5 Un cuarto grupo, ahora conocido como AB, fue descrito por los colegas de Landsteiner en 1902. [30] : 7 Este experimento fue el primer ejemplo de tipificación sanguínea. [1] : 120
En 1945, Robin Coombs , AE Mourant y RR Race publicaron una descripción de la prueba de antiglobulina (también conocida como prueba de Coombs). Investigaciones anteriores sobre anticuerpos de grupos sanguíneos habían documentado la presencia de los llamados anticuerpos "bloqueantes" o "incompletos": anticuerpos que ocupaban los sitios del antígeno, impidiendo que otros anticuerpos se unieran, pero que no provocaban la aglutinación de los glóbulos rojos. Coombs y sus colegas idearon un método para demostrar fácilmente la presencia de estos anticuerpos. Inyectaron inmunoglobulinas humanas en conejos, lo que provocó que produjeran un anticuerpo anti-globulina humana . La globulina antihumana podría unirse a los anticuerpos que ya están adheridos a los glóbulos rojos y hacer que se aglutinen. La invención de la prueba de antiglobulina condujo al descubrimiento de muchos más antígenos de grupos sanguíneos. A principios de la década de 1950, las empresas habían comenzado a producir antisueros comerciales para pruebas especiales de antígenos. [30] : 62–72
Notas
- ^ El antígeno RhD se conoce comúnmente como "factor Rh", aunque hay varios otros antígenos en el sistema de antígenos Rh . [1] : 150 [2] : 26
- ^ Además de C / c, E / e, Duffy, Kidd y MNS, los efectos de dosificación clínicamente significativos son raros pero no imposibles para otros antígenos, que por lo tanto aún pueden considerarse si el emparejamiento cruzado posteriores reactivo.
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