La calceína , también conocida como fluorexona, complejo de fluoresceína , es un tinte fluorescente con longitudes de onda de excitación y emisión de 495/515 nm, respectivamente, y tiene la apariencia de cristales anaranjados. La calceína se apaga automáticamente a concentraciones superiores a 70 mM y se utiliza habitualmente como indicador de la fuga de vesículas lipídicas. [1] [2] [3] También se utiliza tradicionalmente como indicador complexométrico para la titulación de iones de calcio con EDTA y para la determinación fluorométrica de calcio.
Nombres | |
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Nombre IUPAC preferido 2,2 ′, 2 ′ ′, 2 ′ ′ ′ - [(3 ′, 6′-Dihidroxi-3-oxo- 3H -espiro [[2] benzofuran-1,9′-xanteno] -2 ′, 7 Ácido ′ -diil) bis (metilenitrilo)] tetraacético | |
Otros nombres Fluorexón | |
Identificadores | |
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Modelo 3D ( JSmol ) | |
CHEBI | |
CHEMBL | |
ChemSpider | |
Tarjeta de información ECHA | 100.014.507 |
PubChem CID | |
Tablero CompTox ( EPA ) | |
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Propiedades | |
C 30 H 26 N 2 O 13 | |
Masa molar | 622,53 g / mol |
Punto de fusion | Se descompone |
Punto de ebullición | N / A |
Ligeramente soluble | |
Salvo que se indique lo contrario, los datos se proporcionan para materiales en su estado estándar (a 25 ° C [77 ° F], 100 kPa). | |
verificar ( ¿qué es ?) | |
Referencias de Infobox | |
Aplicaciones
El derivado acetometoxi no fluorescente de la calceína (calceína AM, AM = un cetoxi m etilo) se utiliza en biología ya que puede transportarse a través de la membrana celular a las células vivas, lo que lo hace útil para probar la viabilidad celular y a corto plazo. etiquetado de células. Alternativamente, se pueden usar Fura-2 , Furaptra , Indo-1 y aequorin . Un grupo acetometoxi oculta la parte de la molécula que quela el Ca 2+ , Mg 2+ , Zn 2+ y otros iones. Después del transporte a las células, las esterasas intracelulares eliminan el grupo acetometoxi, la molécula queda atrapada en el interior y emite una fuerte fluorescencia verde. Como las células muertas carecen de esterasas activas, sólo las células vivas se marcan [4] y se cuentan mediante citometría de flujo .
En la actualidad, la calceína rara vez se usa como indicador de Ca 2+ o Mg 2+ porque su fluorescencia es directamente sensible a estos iones solo a pH fuertemente alcalino, y por lo tanto no es particularmente útil para medir Ca 2+ o Mg 2+ en células. La fluorescencia de la calceína se apaga fuertemente por Co 2+ , Ni 2+ y Cu 2+ y apreciablemente por Fe 3+ y Mn 2+ a pH fisiológico. Esta respuesta de extinción de la fluorescencia se puede aprovechar para detectar la apertura del poro de transición de la permeabilidad mitocondrial (mPTP) y para medir los cambios de volumen celular. [5] La calceína se usa comúnmente para el rastreo celular y en estudios de endocitosis, migración celular y uniones gap. [6]
El éster de acetoximetilo de calceína también se utiliza para detectar las interacciones medicamentosas con proteínas de resistencia a múltiples fármacos (ABC transportadores de genes casete transportador de unión a ATP ) en células intactas, ya que es un excelente sustrato de la resistencia a múltiples fármacos transportador 1 (MDR1) P-glicoproteína y la Multidrug Proteína asociada a resistencia (MRP1). [7] El ensayo de calceína AM se puede utilizar como modelo para las interacciones fármaco-fármaco, para la detección de sustratos transportadores y / o inhibidores; y también para determinar la resistencia a fármacos in vitro de las células, incluidas muestras de pacientes. [8]
La calceína también se utiliza para marcar el pescado recién eclosionado [9] y para marcar las espinas de los animales vivos.
Referencias
- ^ Allen, TM; Cleland, LG (1980). "Pérdida de contenido de liposomas inducida por suero". Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranas . 597 (2): 418–426. doi : 10.1016 / 0005-2736 (80) 90118-2 . PMID 7370258 .
- ^ Fuga inducida por el virus Sendai de liposomas que contienen gangliósidos Yung Shyeng Tsao y Leaf Huang Biochemistry 1985 24 (5), 1092-1098
- ^ Patel, H .; Tscheka, C .; Heerklotz, H. (2009). "Caracterización de la fuga de vesículas mediante mediciones de la vida útil de la fluorescencia". Materia blanda . 5 (15): 2849–2851. Código Bib : 2009SMat .... 5.2849P . doi : 10.1039 / B908524F .
- ^ "Cómo funcionan los microscopios de luz" . Como funcionan las cosas.
- ^ Hamann, JF; Kiilgard; Litman, T .; Álvarez-Leefmans, J .; Zeuthen, T. (2002). "Medición de cambios de volumen celular por auto-extinción de fluorescencia". J. Fluorescencia . 12 (2): 139-145. doi : 10.1023 / a: 1016832027325 . S2CID 20539474 .
- ^ "Indicadores fluorescentes de Zn 2+ y otros iones metálicos — Sección 19.7" . Sondas moleculares: el manual . invitrogen.
- ^ Glavinas H, Krajcsi P, Cserepes J, Sarkadi B (enero de 2004). "El papel de los transportadores ABC en la farmacorresistencia, el metabolismo y la toxicidad" . Curr Drug Deliv . 1 (1): 27–42. doi : 10.2174 / 1567201043480036 . PMID 16305368 . Archivado desde el original el 19 de julio de 2012.
- ^ Karászi E, Jakab K, Homolya L, et al. (Febrero de 2001). "El ensayo de calceína para la resistencia a múltiples fármacos predice de manera confiable la respuesta a la terapia y la tasa de supervivencia en la leucemia mieloide aguda" . Br. J. Haematol . 112 (2): 308-14. doi : 10.1046 / j.1365-2141.2001.02554.x . PMID 11167823 .
- ^ "Marcado de alevines con calceína" . Fideicomiso para la conservación de la caza y la vida silvestre. Archivado desde el original el 25 de septiembre de 2006.