ColE1 es un plásmido que se encuentra en bacterias . Su nombre deriva del hecho de que porta un gen de la colicina E1 (el gen cea ). También codifica la inmunidad de este producto con el gen imm . Además, el plásmido tiene una serie de genes de movilidad ( mob ). Su tamaño y la presencia de un único sitio de reconocimiento EcoRI hicieron que se lo considerara un vector candidato. [1]
Replicación
La replicación de ColE1 comienza en el origen . 555 pb corriente arriba de este punto, la ARN polimerasa inicia la transcripción de ARNII que actúa como un pre-cebador y comienza la síntesis de la cadena líder . La transcripción se pliega en una estructura secundaria que estabiliza la interacción entre el ARN naciente y el ADN del origen. Este híbrido es atacado por RNasa H , que escinde la cadena de ARN, exponiendo un grupo hidroxilo 3 '. Esto permite que la extensión del filamento principal por la ADN polimerasa I . La síntesis de la hebra retrasada es iniciada posteriormente por una primasa codificada por la célula huésped.1 La replicación se lleva a cabo en su totalidad por proteínas del huésped (ARN polimerasa, ADN polimerasa I y ARNasa H) de modo que la inhibición de la traducción detendrá el crecimiento de las células, pero no la replicación de ColE1. Dado que la traducción de la proteína Rop también se inhibirá, un número de copias superior al normal resultará en estas células.
Control de número de copias
RNAI es una contratranscripción de una sección de RNAII y, por lo tanto, se une a su extremo 5 '. Esto altera el plegamiento de RNAII de modo que el híbrido DNA-RNA no se estabiliza y no se produce la escisión. Esto asegura que a un alto número de copias , la replicación se ralentiza debido al aumento de la concentración de RNAI. Rop es un represor de replicación secundario, estabiliza el híbrido RNAI-RNAII. Rop puede ser especialmente importante para prevenir la replicación descontrolada a tasas de crecimiento lentas.
ColE1 tiene un número de copia de 25-30 según su publicación original [2]
Referencias
- ^ Hershfield, V; et al. (1974). "Plásmido ColE1 como vehículo molecular para la clonación y amplificación de ADN" . Actas de la Academia Nacional de Ciencias . 71 (9): 3455–59. doi : 10.1073 / pnas.71.9.3455 . PMC 433792 . PMID 4610576 .
- ^ Hershfield, V; et al. (1974). "Plásmido ColE1 como vehículo molecular para la clonación y amplificación de ADN" . Actas de la Academia Nacional de Ciencias . 71 (9): 3455–59. doi : 10.1073 / pnas.71.9.3455 . PMC 433792 . PMID 4610576 .