EHA101 fue uno de los primeros y más utilizados plásmidos auxiliares de Agrobacterium para la transferencia de genes de plantas. Creado en 1985 en el laboratorio de Mary-Dell Chilton en la Universidad de Washington en St. Louis , recibió su nombre del estudiante de posgrado que lo construyó. La EH significa "Elizabeth Hood" y la A para " Agrobacterium ". La cepa auxiliar EHA101 es un derivado de A281, la cepa hipervirulenta de A. tumefaciens que causa tumores grandes y de rápido crecimiento en plantas solanáceas . [1] [2] Esta cepa se utiliza para trasladar genes de interés a muchos cientos de especies de plantas en todo el mundo.
Para cultivos recalcitrantes como el maíz , el trigo y el arroz , las cepas auxiliares EHA se emplean a menudo para la transferencia de genes. [3] [4] [5] Estas cepas son eficientes para promover la transferencia de T-ADN debido a la hipervirulencia de los genes vir [2], lo que sugiere que se puede lograr una mayor tasa de éxito en estos cultivos o cultivares "difíciles de transformar" .
El fondo cromosómico de EHA101 es C58C1, una cepa de nopalina curada . [1] Las cepas auxiliares se derivaron de A281, que es A136 (pTiBo542). A281 se diseñó genéticamente mediante una deleción dirigida al sitio de doble cruce para producir EHA101, una cepa con deleción de T-DNA útil para la transferencia de genes diana a las plantas. [2] EHA101 es resistente a la kanamicina por medio de un gen npt I en lugar de T-DNA. La cepa parental, A281, no muestra resistencias a los antibióticos en niveles más altos que los normales de A. tumefaciens.son. Además, otras cepas transconjugantes en el fondo C58C1, no muestran estas resistencias aumentadas a los antibióticos. Por lo tanto, estas características no son simplemente una manifestación del fondo cromosómico, sino muy probablemente una interacción de este plásmido Ti y el fondo cromosómico C58.
El gen npt I en lugar del ADN-T en EHA101 requiere que los plásmidos binarios que se colocan en la cepa codifiquen una resistencia a fármacos distinta a la kanamicina. Las cepas EHA105 se generaron a partir de EHA101 mediante la deleción dirigida al sitio del gen de resistencia a la kanamicina del plásmido Ti; de lo contrario, las cepas son idénticas. [6] Esta última cepa ha sido útil para los biotecnólogos de plantas que usan kanamicina como marcador seleccionable en sus plásmidos binarios.