Adsorción de lecho expandido
La adsorción en lecho expandido (EBA) es una técnica cromatográfica preparativa que hace posible el procesamiento de líquidos viscosos y particulados.
Principio
Los principios de unión a proteínas en EBA son los mismos que en la cromatografía en columna clásica y se pueden usar los ligandos comunes de intercambio iónico , interacción hidrófoba y cromatografía de afinidad . [1] Una vez finalizada la etapa de adsorción, se lava el lecho fluidizado para eliminar las partículas restantes. La elución de las proteínas adsorbidas se realizó comúnmente con el flujo de eluyente en la dirección inversa; es decir, como lecho compacto convencional, para recuperar los solutos adsorbidosen un volumen menor de eluyente. Sin embargo, se ha desarrollado una nueva generación de columnas EBA, que mantienen el lecho en el estado expandido durante esta fase, produciendo altos rendimientos de alta pureza, por ejemplo, de MAbs [anticuerpos monoclonales] en volúmenes de eluyente aún más pequeños. La duración del proceso a escala de fabricación también se ha reducido considerablemente (menos de 7 horas en algunos casos).
Se puede considerar que la EBA combina los pasos de "Eliminación de insolubles" y "Aislamiento" de la heurística de procesamiento posterior de 4 pasos . Las principales limitaciones asociadas con la tecnología EBA son las interacciones y agregaciones de la biomasa en el adsorbente durante el procesamiento. [2]
Cuando la cromatografía en columna clásica usa una fase sólida hecha por un lecho empacado, el EBA usa partículas en un estado fluidizado , idealmente expandidas por un factor de 2. Sin embargo, la adsorción en lecho expandido es diferente de la cromatografía en lecho fluidizado esencialmente en dos formas: una, la La resina EBA contiene partículas de diferentes tamaños y densidades que dan como resultado un gradiente de tamaño de partículas cuando se expanden; y dos, cuando la cama está en su estado expandido, se forman bucles locales. Las partículas tales como células enteras o desechos celulares, que obstruirían una columna de lecho empacado, pasan fácilmente a través de un lecho fluidizado. [3] Por lo tanto, el EBA se puede utilizar en caldos de cultivo crudos o pastas de células rotas, evitando así los pasos iniciales de aclaramiento, como la centrifugación yfiltración , que es obligatoria cuando se utilizan lechos empaquetados. En los diseños de columnas de EBA más antiguos, el caudal de alimentación se mantiene lo suficientemente bajo como para que el empaque sólido permanezca estratificado y no se fluidice por completo. Por lo tanto, el EBA puede modelarse como adsorción frontal en un lecho empacado, en lugar de como un adsorbedor de flujo continuo bien mezclado.
Referencias
- ^ Vennapusa, RR; Binner, S .; Cabrera, R .; Fernández-Lahore, M. (2008). "Energética de superficie para evaluar la adhesión microbiana en adsorbentes de cromatografía fluidizada". Ingeniería en Ciencias de la Vida . 8 (5): 530. doi : 10.1002 / elsc.200800027 . S2CID 84105652 .
- ↑ Vennapusa, R .; Hunegnaw, S .; Cabrera, R .; Fernández-Lahore, M. (2008). "Evaluación de interacciones adsorbente-biomasa durante la adsorción de lecho expandido en intercambiadores de iones que utilizan energía de superficie". Journal of Chromatography A . 1181 (1–2): 9–20. doi : 10.1016 / j.chroma.2007.11.078 . PMID 18199439 .
- ^ Hjorth, R. (1997). "Adsorción de lecho expandido en bioprocesamiento industrial: desarrollos recientes". Tendencias en biotecnología . 15 (6): 230–235. doi : 10.1016 / S0167-7799 (97) 01045-7 . PMID 9183866 .
enlaces externos
- "Adsorción en lecho expandido" , en Modern Drug Discovery
- Introducción a la adsorción en lecho expandido
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