El suero fetal bovino ( FBS ) proviene de la sangre extraída de un feto bovino a través de un sistema cerrado de recolección en el matadero . Suero bovino fetal es el suero-suplemento más ampliamente utilizado para la in vitro de cultivo celular de células eucariotas . Esto se debe a que tiene un nivel muy bajo de anticuerpos y contiene más factores de crecimiento , lo que permite versatilidad en muchas aplicaciones de cultivo celular diferentes.
La proteína globular , albúmina de suero bovino (BSA), es un componente principal del suero bovino fetal. La rica variedad de proteínas del suero fetal bovino mantiene las células cultivadas en un medio en el que pueden sobrevivir, crecer y dividirse.
FBS no es un componente de medio completamente definido y, como tal, puede variar en composición entre lotes. [1] Como resultado, se han desarrollado medios libres de suero y químicamente definidos (MDL) como una cuestión de buenas prácticas de laboratorio . [2] [3] Sin embargo, la eficacia de los medios sin suero es limitada; muchas líneas celulares todavía requieren suero para crecer, y muchas formulaciones de medios sin suero están destinadas a tipos de células estrictamente definidos. [4] Por lo tanto, el suero fetal todavía se usa ampliamente en cultivos celulares. [5]
Producción
El suero fetal bovino es un subproducto de la industria láctea. El suero fetal bovino, al igual que la gran mayoría del suero animal utilizado en el cultivo celular, se produce a partir de sangre extraída en mataderos comerciales de ganado lechero que también suministra carne destinada al consumo humano.
La primera etapa del proceso de producción de suero bovino fetal es la recolección de sangre del feto bovino después de que el feto se extrae de la vaca sacrificada. La sangre se recoge asépticamente en un recipiente o bolsa de sangre estéril y luego se deja coagular. El método normal de recolección es la punción cardíaca, en la que se inserta una aguja en el corazón. Esto minimiza "el peligro de contaminación del suero con microorganismos del propio feto y del medio ambiente". [6] Luego se centrifuga para eliminar el coágulo de fibrina y las células sanguíneas restantes forman el suero de color amarillo claro (pajizo). El suero se congela antes de su procesamiento adicional que es necesario para que sea adecuado para el cultivo celular.
La segunda etapa del procesamiento implica la filtración, normalmente utilizando una cadena de filtración, siendo la filtración final filtros de membrana de 0,1 micrómetros estériles triples. Cuando se procesa por un proveedor de suero comercial de renombre, el suero bovino fetal esterilizado se somete a rigurosas pruebas de control de calidad y se suministra con un certificado de análisis detallado. El certificado proporciona los resultados completos de las pruebas e información sobre el origen del suero. Los certificados de análisis varían entre proveedores comerciales, pero cada uno generalmente incluye los siguientes detalles: declaración de filtración, país de origen, pruebas de rendimiento de crecimiento celular, pruebas de esterilidad microbiana, detección de micoplasmas y virus, endotoxinas , hemoglobina , IgG y ensayos de proteínas totales.
Ética
Se han planteado cuestiones éticas con respecto al proceso de extracción de sangre debido al potencial sufrimiento causado al feto. Aunque la anoxia o el sacrificio activo podrían usarse para inducir la inconsciencia o la muerte antes de la recolección de suero, la exposición de terneros vivos por nacer al oxígeno puede hacer que adquieran conciencia antes de ser sacrificados, [2] resultando en un debate activo sobre la ética de la recolección de suero. [6] [7]
Uso de suero
El suero fetal bovino está disponible comercialmente en muchos fabricantes y, debido a que las células cultivadas in vitro son altamente sensibles, los clientes generalmente prueban lotes específicos para verificar la idoneidad para su tipo celular específico. Al cambiar de un lote a otro, es habitual adaptar las células al nuevo lote de material, por ejemplo, mezclando el 50% del suero antiguo con el 50% del nuevo suero y permitiendo que las células se aclimaten al nuevo material.
El suero se almacena congelado para preservar la estabilidad de componentes como los factores de crecimiento. Cuando se descongela el suero, se puede observar algo de precipitación. Este es un fenómeno normal y no compromete la calidad del suero de ninguna manera. El precipitado puede eliminarse transfiriendo el suero a tubos estériles y centrifugando durante 5 minutos a 400 × g .
Para limitar la cantidad de precipitación, se recomienda que el suero se descongele en un refrigerador a 2-8˚C. El suero debe agitarse regularmente durante este proceso. Deben evitarse los ciclos repetidos de congelación / descongelación y es aconsejable dispensar el suero en alícuotas de un solo uso antes de la congelación.
Problemas técnicos
El FBS contiene un conjunto complejo de componentes proteicos que muchas células necesitan para crecer, por lo que se ha utilizado con éxito en cultivos celulares. Desafortunadamente, grandes cantidades de proteínas indefinidas pueden provocar una estimulación no deseada de las células. Esta es la razón por la que la "inanición de suero" se usa comúnmente en experimentos en los que es necesario medir cambios sutiles en la expresión de citocinas. [8] Aquí es donde se puede usar FBS para mantener las células, pero antes del experimento, el suero se elimina al pasar las células para normalizar la expresión de citocinas. Otro posible enfoque es usar FBS despojado de carbón que no parece ser tan estimulante para las células en cultivo, mientras que al mismo tiempo, apoya el crecimiento de capas de células sanas. [9]
Historia de la fuente
El suero producido para su uso en la industria biotecnológica y los sectores de investigación está muy regulado. La recolección y el movimiento de todos los productos derivados de animales a nivel mundial están estrictamente controlados. El control veterinario de productos derivados de animales sigue en gran medida las regulaciones establecidas por la UE (DG SANCO) y los EE. UU. (USDA). El reglamento actual que rige la importación de subproductos animales en la UE está cubierto por el Reglamento (UE) 1069/2009 y el documento de implementación Reglamento (UE) 142/2011.
FBS es un producto recolectado a nivel mundial con las principales colecciones centradas en Estados Unidos, Australia, Nueva Zelanda, Canadá, Centroamérica, Sudamérica y Europa.
Ventas globales
Las ventas de FBS en 2008 se estimaron en 700.000 litros a nivel mundial.
Los recolectores, fabricantes y usuarios finales de FBS a nivel mundial son miembros de ISIA, la Asociación Internacional de la Industria del Suero. Las empresas miembro se enumeran en el sitio web de ISIA. Los datos de contacto completos están disponibles a través de este portal y el ISIA puede responder cualquier pregunta relacionada con la recopilación y el uso de este importante recurso.
La Asociación Internacional de la Industria del Suero se incorporó en junio de 2006 para autorregular una industria que antes no estaba estandarizada. La Declaración de la Misión de ISIA establece: “ISIA establecerá, promoverá y garantizará el cumplimiento de los estándares absolutos de excelencia y ética en las prácticas comerciales de la industria global de suministro de suero animal y productos derivados de animales. Nuestro enfoque principal estará en la seguridad y el uso seguro de sueros y productos derivados de animales a través de la trazabilidad adecuada del origen, la veracidad en el etiquetado y la estandarización y supervisión adecuadas ”. [10]
Ver también
- Lisado de plaquetas humanas (HPL) como alternativa a FBS
Referencias
- ^ Van Der Valk, enero; Bieback, K .; Buta, C .; Cochrane, B .; Dirks, WG; Fu, J .; Hickman, JJ; Hohensee, C .; Kolar, R .; Liebsch, M .; Pistollato, F .; Schulz, M .; Thieme, D .; Weber, T .; Wiest, J .; Winkler, S .; Gstraunthaler, G. (2018). "Suero fetal bovino (FBS): pasado - presente - futuro" . Altex . 35 (1): 99-118. doi : 10.14573 / altex.1705101 . PMID 28800376 .
- ^ a b van der Valk, J .; Brunner, D .; De Smet, K. (2010). "Optimización de medios de cultivo celular químicamente definidos - Reemplazo de suero bovino fetal en métodos in vitro de mamíferos". Toxicología in Vitro . 24 (4): 1053–1063. doi : 10.1016 / j.tiv.2010.03.016 . hdl : 1874/191398 . PMID 20362047 .
- ^ Yao, Tatsuma; Asayama, Yuta (2017). "Medios de cultivo de células animales: historia, características y actualidad" . Medicina y Biología Reproductiva . 16 (2): 99-117. doi : 10.1002 / rmb2.12024 . PMC 5661806 . PMID 29259457 .
- ^ [1]
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- ^ a b Jochems, C; et al. (2002). "El uso de suero fetal bovino: ¿problema ético o científico?" . Alternativas a los animales de laboratorio . 30 (2): 219-227. doi : 10.1177 / 026119290203000208 . PMID 11971757 . Consultado el 16 de mayo de 2018 .
- ^ Mellor DJ, Gregory NG (2003). "Capacidad de respuesta, excitación conductual y conciencia en corderos fetales y recién nacidos: implicaciones experimentales, prácticas y terapéuticas". Revista veterinaria de Nueva Zelanda . 51 (1): 2-13. doi : 10.1080 / 00480169.2003.36323 . PMID 16032283 .
- ^ Chowdhury, P; Sacos, SH; Sheerin, NS (agosto de 2006). "Los receptores tipo Toll TLR2 y TLR4 inician la respuesta inmune innata del epitelio tubular renal a los productos bacterianos" . Inmunología clínica y experimental . 145 (2): 346–56. doi : 10.1111 / j.1365-2249.2006.03116.x . PMC 1809678 . PMID 16879256 .
- ^ Antypas, Haris; Libberton, Ben; Melican, Keira (octubre de 2014). "Reducción de la expresión de fondo de citocinas en células epiteliales sin privación de suero" . MethodsX . 1 : 251-253. doi : 10.1016 / j.mex.2014.10.003 . PMC 4473026 . PMID 26150960 .
- ^ "Industria del suero" . Consultado el 22 de febrero de 2013 .
enlaces externos
- Introducción a la clase de suero fetal bovino