La captura de genes es un enfoque de alto rendimiento que se utiliza para introducir mutaciones de inserción en el genoma de un organismo.
Método
La captura se realiza con vectores de captura de genes cuyo elemento principal es un casete de captura de genes que consiste en un gen indicador sin promotor y / o un marcador genético seleccionable , flanqueado por un sitio de empalme 3 'aguas arriba (aceptor de empalme; SA) y una secuencia de terminación de la transcripción aguas abajo ( poliadenilación secuencia; poliA).
Cuando se inserta en un intrón de un gen expresado, el casete de trampa de genes se transcribe a partir del promotor endógeno de ese gen en forma de una transcripción de fusión en la que el exón (s) aguas arriba del sitio de inserción se empalma en marco al informador / gen marcador seleccionable. Dado que la transcripción finaliza prematuramente en el sitio de poliadenilación insertado, el transcrito de fusión procesado codifica una versión truncada y no funcional de la proteína celular y el indicador / marcador seleccionable. Por tanto, las trampas de genes inactivan e informan simultáneamente de la expresión del gen atrapado en el sitio de inserción y proporcionan una etiqueta de ADN (etiqueta de secuencia de trampa de genes, GTST) para la identificación rápida del gen alterado . [1] [2]
Acceso
El Consorcio Internacional de Trampas Genéticas está centralizando los datos y suministra líneas celulares modificadas. [3]
Referencias
- ^ Cobellis, G; Nicolaus, G; et al. (2005). "Etiquetado de genes con sitios de intercambio de casetes" . Ácidos nucleicos Res . 33 (4): e44. doi : 10.1093 / nar / gni045 . PMC 552971 . PMID 15741177 .
- ^ De-Zolt, S; Schnutgen, F; et al. (2006). "Atrapamiento de alto rendimiento de genes de la vía secretora en células madre embrionarias de ratón" . Ácidos nucleicos Res . 34 (3): 25. doi : 10.1093 / nar / gnj026 . PMC 1369290 . PMID 16478711 .
- ^ "IGTC, Consorcio Internacional de Trampas Genéticas" . www.genetrap.org . Consultado el 11 de febrero de 2018 .
Otras lecturas
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- Friedrich G, Soriano P (septiembre de 1991). "Trampas de promotores en células madre embrionarias: una pantalla genética para identificar y mutar genes de desarrollo en ratones" . Genes y desarrollo . 5 (9): 1513–23. doi : 10.1101 / gad.5.9.1513 . PMID 1653172 .
- Zambrowicz BP, Friedrich GA, Buxton EC, Lilleberg SL, Persona C, Sands AT (abril de 1998). "Identificación de alteración e secuencia de 2.000 genes en células madre embrionarias de ratón". Naturaleza . 392 (6676): 608-11. doi : 10.1038 / 33423 . PMID 9560157 .
- Wiles MV, Vauti F, Otte J, Füchtbauer EM, Ruiz P, Füchtbauer A, Arnold HH, Lehrach H, Metz T, von Melchner H, Wurst W (enero de 2000). "Establecimiento de una biblioteca de etiquetas de secuencia de trampa de genes para generar ratones mutantes a partir de células madre embrionarias". Genética de la naturaleza . 24 (1): 13–4. doi : 10.1038 / 71622 . PMID 10615117 .
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