El isopropil β- d -1-tiogalactopiranósido ( IPTG ) es un reactivo de biología molecular . Este compuesto es una imitación molecular de la alolactosa , un metabolito de lactosa que desencadena la transcripción del operón lac y, por lo tanto, se utiliza para inducir la expresión de proteínas donde el gen está bajo el control del operador lac .
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Nombres | |
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Nombre IUPAC Propan-2-il 1-tio-β- D -galactopiranósido | |
Nombre IUPAC preferido (2 R , 3 R , 4 S , 5 R , 6 S ) -2- (hidroximetil) -6 - [(propan-2-il) sulfanil] oxano-3,4,5-triol | |
Identificadores | |
Modelo 3D ( JSmol ) | |
ChemSpider | |
Tarjeta de información ECHA | 100.006.094 ![]() |
Malla | Isopropil + tiogalactósido |
PubChem CID | |
UNII | |
Tablero CompTox ( EPA ) | |
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Propiedades | |
C 9 H 18 O 5 S | |
Masa molar | 238,30 g · mol −1 |
Salvo que se indique lo contrario, los datos se proporcionan para materiales en su estado estándar (a 25 ° C [77 ° F], 100 kPa). | |
Referencias de Infobox | |
Mecanismo de acción
Al igual que la alolactosa, IPTG se une al represor lac y libera el represor tetramérico del operador lac de manera alostérica , lo que permite la transcripción de genes en el operón lac, como el gen que codifica la beta-galactosidasa , una enzima hidrolasa que cataliza la hidrólisis de β-galactósidos en monosacáridos. Pero a diferencia de la alolactosa, el átomo de azufre ( S ) crea un enlace químico que la célula no puede hidrolizar, lo que evita que la célula metabolice o degrade el inductor . Por tanto, su concentración permanece constante durante un experimento.
La captación de IPTG por E. coli puede ser independiente de la acción de la lactosa permeasa , ya que también están implicadas otras vías de transporte. [1] A baja concentración, IPTG ingresa a las células a través de la lactosa permeasa, pero a altas concentraciones (generalmente utilizadas para la inducción de proteínas), IPTG puede ingresar a las células independientemente de la lactosa permeasa. [2]
Uso en laboratorio
Cuando se almacena en forma de polvo a 4 ° C o menos, IPTG es estable durante 5 años. Es significativamente menos estable en solución; Sigma recomienda almacenar durante no más de un mes a temperatura ambiente. [3] IPTG es un inductor eficaz de la expresión de proteínas en el intervalo de concentración de 100 mmol / L a 3,0 mmol / L . Por lo general, se agrega una solución estéril filtrada de 1 mol / L de IPTG 1: 1000 a un cultivo bacteriano de crecimiento exponencial, para dar una concentración final de 1 mmol / L. La concentración utilizada depende de la fuerza de inducción requerida, así como del genotipo de células o plásmido utilizado. Si está presente lacI q , un mutante que sobreproduce el represor lac, entonces puede ser necesaria una concentración más alta de IPTG. [4]
En la pantalla azul-blanca , IPTG se usa junto con X-gal . La pantalla azul-blanca permite identificar colonias que se han transformado con el plásmido recombinante en lugar de uno no recombinante en experimentos de clonación. [ cita requerida ]
Referencias
- ^ Hansen LH, Knudsen S, Sørensen SJ (junio de 1998). "El efecto del gen lacY sobre la inducción de promotores inducibles de IPTG, estudiado en Escherichia coli y Pseudomonas fluorescens " . Curr. Microbiol . 36 (6): 341–7. doi : 10.1007 / s002849900320 . PMID 9608745 . Archivado desde el original el 18 de octubre de 2000.
- ^ Marbach A, Bettenbrock K (2012). "inducción del operón lac en Escherichia coli: comparación sistemática de la inducción de IPTG y TMG e influencia de la transacetilasa LacA". Revista de Biotecnología . 157 (1): 82–8. doi : 10.1016 / j.jbiotec.2011.10.009 . PMID 22079752 .
- ^ https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma-Aldrich/Product_Information_Sheet/i5502pis.pdf
- ^ Células competentes BL21 (DE3), Células competentes BL21 (DE3) pLysS y Células competentes BL21 Manual de instrucciones (Revisión n. ° 066004e ed.). La Jolla, CA: Stratagene. 2006. p. 7.
enlaces externos
- IPTG unido a proteínas en el AP