Anticuerpos primarios y secundarios
Los anticuerpos primarios y secundarios son dos grupos de anticuerpos que se clasifican en función de si se unen a antígenos o proteínas directamente o se dirigen a otro anticuerpo (primario) que, a su vez, se une a un antígeno o proteína .
Un anticuerpo primario puede ser muy útil para la detección de biomarcadores de enfermedades como el cáncer, la diabetes, el Parkinson y el Alzheimer y se utilizan para el estudio de la absorción, distribución, metabolismo y excreción (ADME) y la resistencia a múltiples fármacos (MDR). ) de agentes terapéuticos.
Los anticuerpos secundarios proporcionan detección y amplificación de señales además de extender la utilidad de un anticuerpo a través de la conjugación con proteínas. [1] Los anticuerpos secundarios son especialmente eficaces en el inmunomarcaje . Los anticuerpos secundarios se unen a los anticuerpos primarios, que se unen directamente a los antígenos diana. En el inmunomarcaje, el dominio Fab del anticuerpo primario se une a un antígeno y expone su dominio Fcal anticuerpo secundario. Luego, el dominio Fab del anticuerpo secundario se une al dominio Fc del anticuerpo primario. Dado que el dominio Fc es constante dentro de la misma clase de animales, solo se requiere un tipo de anticuerpo secundario para unirse a muchos tipos de anticuerpos primarios. Esto reduce el costo al marcar solo un tipo de anticuerpo secundario, en lugar de marcar varios tipos de anticuerpos primarios. Los anticuerpos secundarios ayudan a aumentar la sensibilidad y la amplificación de la señal debido a la unión de múltiples anticuerpos secundarios a un anticuerpo primario. [2]
Los anticuerpos secundarios de molécula de inmunoglobulina completa son el formato más utilizado, pero se pueden procesar enzimáticamente para permitir el refinamiento del ensayo. Los fragmentos F(ab') 2 se generan mediante la digestión con pepsina para eliminar la mayor parte del fragmento Fc, lo que evita el reconocimiento por parte de los receptores Fc en las células vivas, o de la Proteína A o la Proteína G. [3] La digestión con papaína genera fragmentos Fab, que eliminan el fragmento Fc completo que incluye la región bisagra, produciendo dos restos Fab monovalentes. Pueden usarse para bloquear inmunoglobulinas endógenas en células, tejidos u otras superficies, y para bloquear las inmunoglobulinas expuestas en múltiples experimentos de marcaje utilizando anticuerpos primarios de la misma especie. [4]
Los anticuerpos secundarios se pueden conjugar con enzimas como la peroxidasa de rábano picante (HRP) o la fosfatasa alcalina (AP); o colorantes fluorescentes como el isotiocianato de fluoresceína (FITC), derivados de la rodamina , colorantes Alexa Fluor ; u otras moléculas para ser utilizadas en diversas aplicaciones. Los anticuerpos secundarios se utilizan en muchos ensayos bioquímicos [5], incluidos:
