Microinyección
La microinyección es el uso de una micropipeta de vidrio para inyectar una sustancia líquida a un nivel macroscópico microscópico o limítrofe . El objetivo suele ser una célula viva, pero también puede incluir el espacio intercelular. La microinyección es un proceso mecánico simple que generalmente involucra un microscopio invertido con una potencia de aumento de alrededor de 200x (aunque a veces se realiza usando un microscopio estereoscópico de disección a 40–50x o un microscopio vertical compuesto tradicional con una potencia similar a un modelo invertido).
Para procesos como la inyección celular o pronuclear , la célula diana se coloca bajo el microscopio y se colocan dos micromanipuladores , uno que sostiene la pipeta y otro que sostiene una aguja microcapilar, generalmente entre 0,5 y 5 µm de diámetro (más grande si se inyectan células madre en un embrión). utilizado para penetrar la membrana celular y/o la envoltura nuclear . [1] De esta forma, el proceso se puede utilizar para introducir un vector en una sola celda. La microinyección también se puede utilizar en la clonación de organismos, en el estudio de la biología celular y los virus, y para el tratamiento de la subfertilidad masculina medianteinyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI, / ˈ ɪ k s i / IK -ver ).
El uso de la microinyección como procedimiento biológico comenzó a principios del siglo XX, aunque incluso durante la década de 1970 no era de uso común. En la década de 1990, su uso aumentó significativamente y ahora se considera una técnica de laboratorio común, junto con la fusión de vesículas , la electroporación , la transfección química y la transducción viral , para introducir una pequeña cantidad de una sustancia en un objetivo pequeño. [2]
Hay dos tipos básicos de sistemas de microinyección. El primero se llama sistema de flujo constante y el segundo se llama sistema de flujo pulsado . En un sistema de flujo constante, que es relativamente simple y económico aunque torpe y obsoleto, se administra un flujo constante de una muestra desde una micropipeta y la cantidad de muestra que se inyecta está determinada por el tiempo que permanece la aguja en la celda. Este sistema generalmente requiere una fuente de presión regulada, un soporte de capilar y un micromanipulador grueso o fino. Sin embargo, un sistema de flujo pulsado permite un mayor control y consistencia sobre la cantidad de muestra inyectada: el arreglo más común para la inyección intracitoplasmática de espermatozoides incluye unInyector Eppendorf "Femtojet" junto con un Eppendorf "InjectMan", aunque los procedimientos que involucran otros objetivos generalmente aprovechan equipos mucho menos costosos de capacidad similar. Debido a su mayor control sobre la colocación y el movimiento de la aguja y además de la mayor precisión sobre el volumen de sustancia administrada, la técnica de flujo pulsado generalmente produce menos daño a la celda receptora que la técnica de flujo constante. Sin embargo, la línea Eppendorf, al menos, tiene una interfaz de usuario compleja y los componentes particulares de su sistema suelen ser mucho más caros que los necesarios para crear un sistema de flujo constante o que otros sistemas de inyección de flujo pulsado. [3]
La inyección pronuclear es una técnica utilizada para crear organismos transgénicos mediante la inyección de material genético en el núcleo de un ovocito fertilizado . Esta técnica se usa comúnmente para estudiar el papel de los genes utilizando modelos animales de ratón.
