Análisis de seguimiento de pulsos
En bioquímica y biología molecular, un análisis de persecución de pulsos es un método para examinar un proceso celular que ocurre con el tiempo al exponer sucesivamente las células a un compuesto marcado (pulso) y luego al mismo compuesto en una forma no etiquetada (persecución). [1]
Una célula seleccionada o un grupo de células se expone primero a un compuesto marcado (el pulso) que se incorporará a una molécula o sistema que se está estudiando (ver también etiquetado de pulsos ). El compuesto luego pasa por las vías metabólicas y se utiliza en la síntesis del producto estudiado. Por ejemplo, se puede suministrar una forma de leucina marcada radiactivamente ( 3 H-leucina) a un grupo de células beta pancreáticas , que luego utilizan este aminoácido en la síntesis de insulina .
Poco después de la introducción del compuesto marcado (normalmente unos 5 minutos, pero el tiempo real necesario depende del objeto estudiado), se introduce en el medio ambiente un exceso de la misma sustancia, pero sin marcar (la persecución). Siguiendo el ejemplo anterior, la producción de insulina continuaría, pero ya no contendría la leucina radiactiva introducida en la fase de pulso y no sería visible mediante métodos de detección radiactiva. Sin embargo, el movimiento de la insulina marcada producida durante el período del pulso aún podría rastrearse dentro de la célula. [2]
Este método es útil para determinar la actividad de ciertas células durante un período de tiempo prolongado. El método se ha utilizado para estudiar la proteína quinasa C , la ubiquitina y muchas otras proteínas. El método también se utilizó para probar la existencia y función de los fragmentos de Okazaki . George Palade utilizó la búsqueda de pulsos de aminoácidos radiactivos para dilucidar la vía secretora . [3] [4]
