La conversión inducida por temblores en tiempo real ( RT-QuIC ) es un ensayo muy sensible para la detección de priones . [ cita requerida ]
El "temblor" en el nombre de la técnica se refiere al hecho de que las muestras en el ensayo RT-QuIC se someten literalmente a agitación. Esta acción rompe agregados de proteína priónica (PrP) que luego se incuban más, amplificando la cantidad de PrP mal plegada a niveles detectables. [1] [2]
Es "un ensayo temprano, rápido y específico para enfermedades priónicas". Toma muestras de líquido cefalorraquídeo (LCR), por lo que es aplicable a la tembladera en ovejas, la caquexia crónica (CWD) en cérvidos, la encefalopatía espongiforme bovina (BSE) en vacas y la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob esporádica en humanos, entre otras. [3]
El ensayo RT-QuIC utiliza priones plegados normalmente producidos de forma recombinante en exceso, a menudo una proteína de hámster sirio truncada, aminoácidos 90-231. Se agregan muestras sospechosas de contener priones mal plegados, lo que provoca el mal plegamiento y la agregación de priones normalmente plegados. Estos agregados de proteína pueden detectarse mediante detección de fluorescencia de espectro visible de tioflavina T. [4] [5] [6] Los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades incluyen un resultado positivo de RT-QuIC en sus criterios de diagnóstico para el diagnóstico probable de sCJD. [7]
Los ensayos RT-QuIC también se pueden usar para detectar scrapie, BSE, CWD y sCJD. Varios procedimientos pueden mejorar la sensibilidad y la especificidad. La extracción de metal con óxido de hierro (IOME) utiliza la afinidad natural por el metal de la proteína priónica; una muestra se incuba con perlas magnéticas, que se unen a la proteína priónica. La fracción de perlas rica en priones se recolecta y analiza posteriormente. [8]
Los tejidos comúnmente analizados son homogeneizados de cerebro y tejidos linfáticos, sin embargo, se han detectado priones en muestras de piel y sangre. [9] [10] [11] Ciertos tejidos pueden ser difíciles de analizar en busca de priones. Por ejemplo, las muestras de sangre tienden a tener niveles bajos de priones intracelulares circulantes, así como de inhibidores. [12]