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La inmunodifusión radial (RID) o el método de Mancini, la inmunodifusión de Mancini o el ensayo de inmunodifusión radial simple, es una técnica de inmunodifusión utilizada en inmunología para determinar la cantidad o concentración de un antígeno en una muestra.

Descripción [ editar ]

Preparación [ editar ]

Se añade una solución que contiene anticuerpo a un medio calentado como agar o agarosa disuelto en solución salina normal tamponada . El medio fundido se vierte luego en un portaobjetos de microscopio o en un recipiente abierto, como una placa de Petri , y se deja enfriar y formar un gel . [1] [2] [3] Luego se coloca una solución que contiene el antígeno en un pocillo que se perfora en el gel. [2] [3] [4] El portaobjetos o recipiente se tapa o se cierra para evitar la evaporación. [2] [3] [4]

El antígeno se difunde radialmente en el medio, formando un círculo de precipitina que marca el límite entre el anticuerpo y el antígeno. [1] El diámetro del círculo aumenta con el tiempo a medida que el antígeno se difunde en el medio, reacciona con el anticuerpo y forma complejos de precipitina insolubles . [1] [2] [5] El antígeno se cuantifica midiendo el diámetro del círculo de precipitina y comparándolo con los diámetros de los círculos de precipitina formados por cantidades o concentraciones conocidas del antígeno. [1] [2] [3] [6]

Los complejos antígeno-anticuerpo son pequeños y solubles cuando están en exceso de antígeno. Por lo tanto, la precipitación cerca del centro del círculo suele ser menos densa que cerca del borde exterior del círculo, donde el antígeno está menos concentrado. [1] [2]

La expansión del círculo alcanza un punto final y se detiene cuando el antígeno libre se agota y cuando el antígeno y el anticuerpo alcanzan la equivalencia. [1] [2] [5] Sin embargo, la claridad y densidad del borde exterior del círculo pueden continuar aumentando después de que el círculo deja de expandirse. [1]

Interpretación [ editar ]

Para la mayoría de los antígenos, el área y el cuadrado del diámetro del círculo en el punto final del círculo son directamente proporcionales a la cantidad de antígeno e inversamente proporcionales a la concentración de anticuerpo. [1] [2] [5] Por lo tanto, un gráfico que compare las cantidades o concentraciones de antígeno en las muestras originales con las áreas o los cuadrados de los diámetros de los círculos de precipitina en escalas lineales generalmente será una línea recta después de todos los círculos. han alcanzado sus puntos finales (método de equivalencia). [1] [3] [5] [6]

Los círculos que crean pequeñas cantidades de antígeno alcanzan sus puntos finales antes de que los círculos que crean grandes cantidades lo hagan. [1] [2] [5] Por lo tanto, si se miden áreas o diámetros de círculos mientras algunos, pero no todos, los círculos han dejado de expandirse, dicha gráfica será recta en la porción que contiene las cantidades o concentraciones más pequeñas de antígeno y se curvará en la parte que contenga las mayores cantidades o concentraciones. [1] [5]

Mientras los círculos aún se están expandiendo, un gráfico que compare las cantidades o concentraciones del antígeno en una escala logarítmica con los diámetros o áreas de los círculos en una escala lineal puede ser una línea recta (método cinético). [1] [2] [4] [5] [6] [7] Sin embargo, los círculos del precipitado son más pequeños y menos distintos durante la expansión que después de que la expansión ha terminado. [1] [5] Además, la temperatura afecta la tasa de expansión, pero no afecta el tamaño de un círculo en su punto final. [1]Además, el rango de diámetros de los círculos para las mismas cantidades o concentraciones de antígeno es más pequeño mientras que algunos círculos aumentan de tamaño que después de que todos los círculos hayan alcanzado sus puntos finales. [1] [5]

La cantidad y concentración de complejos antígeno-anticuerpo insolubles en el borde exterior del círculo aumentan con el tiempo. [1] Por lo tanto, la claridad y densidad del borde exterior del círculo también aumentan con el tiempo. [1] Como resultado, las medidas de los tamaños de los círculos y los gráficos producidos a partir de estas medidas suelen ser más precisas después de que los círculos han dejado de expandirse que cuando los círculos aún se están agrandando. [1] Por esas razones, a menudo es más deseable tomar medidas después de que todos los círculos hayan alcanzado sus puntos finales que tomar medidas mientras algunos o todos los círculos aún se están agrandando. [1]

Las medidas de círculos grandes son más precisas que las de círculos pequeños. [1] [8] Por lo tanto, a menudo es deseable ajustar la concentración de anticuerpo y la cantidad de antígeno para asegurar que los anillos de precipitina sean grandes. [1]

Técnicas de inmunodifusión radial [ editar ]

  • Medir círculos mientras todos se expanden (método cinético) [4]
  • Los círculos de medición después de que todos alcanzan sus puntos finales (método de equivalencia) [2] [3]

Referencias [ editar ]

  1. ^ a b c d e f g h i j k l m n o p q r s t u Berna BH (1 de enero de 1974). "Diferentes metodologías y ecuaciones utilizadas en la cuantificación de inmunoglobulinas por inmunodifusión radial: una evaluación comparativa de técnicas informadas y comerciales" (PDF) . Química clínica . Washington, DC: Asociación Estadounidense de Química Clínica . 20 (1): 61–69. doi : 10.1093 / clinchem / 20.1.61 . ISSN  0095-1137. LCCN  58002529 . OCLC  43430009 . PMID  4203461 . Archivado desde el original (PDF) el 8 de agosto de 2017 . Consultado el 15 de noviembre de 2015 .
  2. ↑ a b c d e f g h i j k Davis NC, Ho M (1976). "Capítulo 2: Cuantificación de inmunoglobulinas: inmunodifusión radial" . En Rose N, Friedman H (eds.). Manual de inmunología clínica . Washington, DC : Sociedad Estadounidense de Microbiología . págs. 5-8. ISBN 0-914826-09-3. LCCN  76017595 . OCLC  1036571523 . Consultado el 14 de junio de 2019 a través de Internet Archive .
  3. ↑ a b c d e f Stanley J (2002). "Capítulo 12: precipitación: inmunodifusión radial simple: técnica de laboratorio 12-1: prueba de inmunodifusión radial" . Fundamentos de inmunología y serología . Albany, Nueva York : División Delmar de Thomson Learning . págs. 172-174. ISBN 978-0914826255. LCCN  2002280630 . OCLC  1149023866 . Consultado el 15 de mayo de 2017 a través de Internet Archive . CS1 maint: parámetro desalentado ( enlace )
  4. ^ a b c d Laboratorio de microbiología dental LSUMC / MIP (2002). "II. Trabajo de laboratorio: B. Inmunodifusión radial" . Ejercicio 3: Antígeno-Anticuerpo I . Nueva Orleans, Luisiana : Facultad de Medicina de la Universidad Estatal de Luisiana : Departamento de Microbiología, Inmunología y Parasitología. Archivado desde el original el 4 de agosto de 2004 . Consultado el 14 de noviembre de 2015 .
  5. ↑ a b c d e f g h i (1) Mancini G, Carbonara AO, Heremans JF (septiembre de 1965). "Cuantificación inmunoquímica de antígenos por inmunodifusión radial simple" . Inmunoquímica . Oxford , Inglaterra : Pergamon Press . 2 (3): 235–254. doi : 10.1016 / 0019-2791 (65) 90004-2 . ISSN 0019-2791 . LCCN 64009461 . OCLC 53097967 . PMID 4956917 . Consultado el 8 de julio de 2020.    - a través de ScienceDirect . CS1 maint: parámetro desalentado ( enlace )
    (2) Mancini G, Vaerman JP, Carbonara AO, Heremans JF (diciembre de 1964). Peeters, Hubert (ed.). Un método de difusión radial simple para la cuantificación inmunológica de proteínas . Protides de los fluidos biológicos: Actas del XI Coloquio, Brujas , Bélgica (1963) . Amsterdam , Países Bajos : Elsevier . págs. 370–373. OCLC 25285708 . Consultado el 8 de julio de 2020 a través de Google Books .  CS1 maint: parámetro desalentado ( enlace )
  6. ↑ a b c Parvez Z (1984). "Capítulo 4: Revisión de técnicas inmunológicas: inmunodifusión radial (RID)" . Inmunoensayos en pruebas de coagulación . Nueva York: Springer-Verlag . págs. 21-22. doi : 10.1007 / 978-1-4615-7225-1_5 . ISBN 9781461572251. LCCN  83020115 . OCLC  851823206 . Archivado desde el original el 8 de julio de 2020 . Consultado el 8 de julio de 2020 . CS1 maint: parámetro desalentado ( enlace ).
  7. ↑ Fahey JL, McKelvey EM (1 de enero de 1965). "Determinación cuantitativa de inmunoglobulinas séricas en placas de agar anticuerpo" (PDF) . Revista de inmunología . Baltimore, Maryland : Asociación Estadounidense de Inmunólogos . 94 (1): 84–90. ISSN 1048-3233 . LCCN sf85007036 . OCLC 204767467 . PMID 14253527 . Archivado desde el original el 25 de febrero de 2018 . Consultado el 8 de julio de 2007 .     .
  8. ^ Kalff, MW (marzo de 1970). "Determinación cuantitativa de los niveles de inmunoglobulina sérica por inmunodifusión radial simple" . Bioquímica clínica . Elsevier . 3 (1): 91-104. doi : 10.1016 / S0009-9120 (70) 80011-X . PMID 4110625 . Archivado desde el original el 10 de enero de 2021 . Consultado el 10 de enero de 2021 a través de ScienceDirect . 4. El coeficiente de variación de las determinaciones de inmunoglobulina en un lote de suero problema cuantificado repetidamente en el transcurso de diez meses, se tomó como medida para la reproducibilidad del método. Este coeficiente fue del 8,5% para IgG , 5,8% para IgA y 4,4% para IgM . Los niveles de inmunoglobulina en este suero de prueba se encuentran en el rango medio de las líneas de calibración . La precisión del método aumenta con la altura de la línea de calibración..

Lectura adicional [ editar ]

  • Mancini G (29 de junio de 1992). "Clásico de citas de esta semana: refinando el Angelotron" (PDF) . Contenidos actuales . 35 (26): 9. ISSN  0272-1449 . OCLC  6568530 . Archivado (PDF) desde el original el 7 de agosto de 2017 . Consultado el 7 de agosto de 2017 . CS1 maint: parámetro desalentado ( enlace ).
  • Ritzmann SE (julio de 1978). "Inmunodifusión radial revisada. Parte 1" (PDF) . Medicina de laboratorio . Sociedad Estadounidense de Patología Clínica y Oxford University Press . 9 (7): 23–33. doi : 10.1093 / labmed / 9.7.23 . ISSN  1943-7730 . OCLC  614490269 . Archivado desde el original (PDF) el 29 de octubre de 2017 . Consultado el 29 de octubre de 2017 . CS1 maint: parámetro desalentado ( enlace )
  • Ritzmann SE (agosto de 1978). "Inmunodifusión radial revisada. Parte 2. Aplicación e interpretación de los ensayos RID" (PDF) . Medicina de laboratorio . Sociedad Estadounidense de Patología Clínica y Oxford University Press . 9 (8): 27–40. doi : 10.1093 / labmed / 9.8.27 . ISSN  1943-7730 . OCLC  614490269 . Archivado desde el original (PDF) el 7 de agosto de 2017 . Consultado el 7 de agosto de 2017 . CS1 maint: parámetro desalentado ( enlace )
  • Taylor RN, Fulford KM, Huong AY (julio de 1978). "Comparación de métodos de difusión cinética y de punto final para cuantificar inmunoglobulinas de suero humano" (PDF) . Revista de microbiología clínica . Washington, DC: Sociedad Estadounidense de Microbiología . 8 (1): 23-27. ISSN  0095-1137 . OCLC  909257436 . PMC  275108 . PMID  97309 . Archivado (PDF) desde el original el 5 de julio de 2020 . Consultado el 6 de agosto de 2020 . CS1 maint: parámetro desalentado ( enlace ).

Enlaces externos [ editar ]

  • Bhattacharjee S (29 de noviembre de 2013). "Inmunodifusión radial" (video) . Biología de Shomu . Consultado el 27 de junio de 2016 a través de YouTube . Vídeo introductorio sobre la teoría y la técnica de la inmunodifusión radial (10:21 minutos).
  • Shaikh S (24 de septiembre de 2015). "Inmunodifusión radial (Kit didáctico)" (video) . Consultado el 13 de mayo de 2017 , a través de YouTube . Video introductorio que demuestra la técnica de inmunodifusión radial (3:43 minutos).
  • "Inmunodifusión radial (técnica de Mancini)" (video) . Conferencias de Frank . 2017-08-08 . Consultado el 31 de julio de 2020 , a través de YouTube . CS1 maint: parámetro desalentado ( enlace )Conferencia introductoria / presentación de diapositivas que ilustra la teoría y la técnica de la inmunodifusión radial. (6:56 minutos)
  • "Inmunodifusión radial" . Edvotek, Inc. 2017. Archivado desde el original (fotografía) el 7 de agosto de 2017 . Consultado el 7 de agosto de 2017 . Fotografía de círculos de precipitina en una placa de Petri durante la inmunodifusión radial.