En microbiología , el rayado es una técnica utilizada para aislar una cepa pura de una única especie de microorganismo, a menudo bacterias . A continuación, se pueden tomar muestras de las colonias resultantes y se puede cultivar un cultivo microbiológico en una nueva placa para que el organismo pueda identificarse, estudiarse o analizarse.
El método moderno de placas de rayas ha progresado a partir de los esfuerzos de Robert Koch y otros microbiólogos para obtener cultivos microbiológicos de bacterias con el fin de estudiarlas. El método de dilución o aislamiento por rayas fue desarrollado por primera vez por Loeffler y Gaffky en el laboratorio de Koch, que implica la dilución de bacterias esparciéndolas sistemáticamente sobre el exterior del agar en una placa de Petri para obtener colonias aisladas que luego crecerán en cantidad de células. , o colonias aisladas. Si en la superficie del agar se desarrollan microorganismos que son todos genéticamente iguales, el cultivo se considera un cultivo microbiológico .
Técnica
El rayado es rápido e idealmente un proceso simple de dilución del aislamiento. La técnica se realiza diluyendo una concentración relativamente grande de bacterias a una concentración menor. La disminución de bacterias debería mostrar que las colonias están lo suficientemente separadas como para afectar la separación de los diferentes tipos de microbios . El rayado se realiza con una herramienta estéril , como un hisopo de algodón o comúnmente un asa de inoculación . Se utilizan técnicas asépticas para mantener cultivos microbiológicos y prevenir la contaminación del medio de cultivo . Hay muchos tipos diferentes de métodos que se utilizan para rayar un plato. Elegir una técnica es una cuestión de preferencia individual y también puede depender de la cantidad de microbios que contenga la muestra.
El patrón de rayas de tres fases, conocido como T-Streak, se recomienda para principiantes. El rayado se realiza con una herramienta estéril , como un hisopo de algodón o comúnmente un asa de inoculación . El asa de inoculación se esteriliza primero pasándolo a través de una llama. Cuando el asa se enfría, se sumerge en un inóculo , como un caldo o una muestra de paciente que contiene muchas especies de bacterias. El asa de inoculación se arrastra luego a través de la superficie del agar hacia adelante y hacia atrás en un movimiento en zigzag hasta cubrir aproximadamente el 30% de la placa. Luego, el bucle se vuelve a esterilizar y la placa se gira 90 grados. Comenzando en la sección previamente rayada, el bucle se arrastra a través de él dos o tres veces continuando el patrón en zigzag. Luego se repite el procedimiento una vez más teniendo cuidado de no tocar los sectores previamente rayados. Cada vez, el circuito reúne cada vez menos bacterias hasta que solo reúne células bacterianas individuales que pueden convertirse en una colonia. La placa debe mostrar el crecimiento más pesado en la primera sección. La segunda sección tendrá menos crecimiento y algunas colonias aisladas, mientras que la sección final tendrá la menor cantidad de crecimiento y muchas colonias aisladas.
Medio de crecimiento
La muestra se distribuye en un cuadrante de una placa de Petri que contiene un medio de cultivo . Las bacterias necesitan diferentes nutrientes para crecer. Esto incluye agua, una fuente de energía, fuentes de carbono, azufre, nitrógeno, fósforo, ciertos minerales y otras vitaminas y factores de crecimiento. Un tipo de medio muy común utilizado en los laboratorios de microbiología se conoce como agar , una sustancia gelatinosa derivada de las algas marinas. El agar nutritivo tiene muchos ingredientes con cantidades desconocidas de nutrientes. Por un lado, este puede ser un medio de uso muy selectivo porque, como se mencionó, las bacterias son particulares. Si hay un determinado nutriente en el medio, la bacteria seguramente no crecerá y podría morir . Por otro lado, este medio es muy complejo. Los medios complejos son importantes porque permiten una amplia gama de crecimiento microbiano. El crecimiento de bacterias puede ser apoyado por este medio en gran parte debido a la gran cantidad de nutrientes. La elección del medio de cultivo que se usa depende de qué microorganismo se está cultivando o seleccionando.
Incubación
Dependiendo de la cepa, la placa se puede incubar , generalmente durante 24 a 36 horas, para permitir que las bacterias se reproduzcan. Al final de la incubación, debe haber suficientes bacterias para formar colonias visibles en las áreas tocadas por el asa de inoculación. A partir de estas colonias mixtas, se pueden identificar especies bacterianas o fúngicas individuales en función de sus diferencias morfológicas (tamaño / forma / color) y luego subcultivarlas en una nueva placa de medio para producir un cultivo puro para análisis adicionales.
El equipo automatizado se utiliza a nivel industrial para rayar los medios sólidos con el fin de lograr una mejor esterilización y consistencia de las rayas y para un trabajo más rápido y confiable. Mientras se raya manualmente, es importante evitar rayar el medio sólido, ya que las líneas de rayas posteriores se dañarán y la deposición no uniforme del inóculo en los sitios dañados en el crecimiento de microbios en racimos de rendimiento medio que puede extenderse a las líneas de rayas cercanas.
Importancia
Las bacterias existen en el agua, el suelo y los alimentos, en la piel y en la flora normal del tracto intestinal . La variedad de microbios que existen en el medio ambiente y en los cuerpos humanos es enorme. El cuerpo humano tiene miles de millones de bacterias que crean la flora normal que lucha contra los patógenos invasores. Las bacterias se encuentran con frecuencia en poblaciones mixtas. Es muy raro encontrar una sola especie de bacteria. Para poder estudiar las características culturales, morfológicas y fisiológicas de una especie individual, es vital que la bacteria se separe de las otras especies que generalmente se originan en el medio ambiente. Esto es importante para determinar una bacteria en una muestra clínica. Cuando la bacteria se raya y se aísla, se puede identificar el agente causante de una enfermedad bacteriana.
Ver también
Referencias
- Black, Jacquelyn G. Microbiología: principios y exploraciones Marymount University, 1999
- Biotecnología e Ingeniería Biomédica: Amrita Vishwa Vidyapeetham Virtual Lab.
- http://www.personal.psu.edu/faculty/k/h/khb4/enve301/301labs/lab4pureculture.html
- Bauman, R. (2004) Microbiología. Pearson Benjamin Cummings.
- Austerjost J, Marquard D, Raddatz L, Geier D, Becker T, Scheper T, Lindner, P, Beutel S. 2017. Una aplicación de dispositivo inteligente para la determinación automatizada de colonias de E. coli en placas de agar. Ingeniería en Ciencias de la Vida. 17 (8): 959-966.
- Bhattacharjee K, Joshi S. 2016. Un medio selectivo para la recuperación y enumeración de bacterias endolíticas. Revista de métodos microbiológicos. 129 (1): 44-54.
- Brugger S, Baumberger C, Jost M, Jenni W, Brugger U, Mühlemann K. 2012. Recuento automatizado de unidades formadoras de colonias bacterianas en placas de agar. Más uno. 7 (3): 1-6.
- Chang G, Grinshpun S, Willeke K, Mancher, J, Donnelly C. 1995. Factores que afectan la precisión del recuento de colonias microbiológicas para el muestreo y análisis de bioaerosol. Revista de la Asociación Estadounidense de Higiene Industrial. 56 (10): 979-986.
- Choi Q, Kim HJ, Kim JW, Kwon GC, Koo SH. 2018. Sistema de rayado manual versus automático en laboratorio de microbiología clínica: Evaluación del desempeño de Previ Isola para hemocultivo y muestras de fluidos corporales. Revista de análisis de laboratorio clínico. 32 (5): 1-7.
- Geun C, Myoungjoo R, Choong-Min R. 2019. Más allá de los dos compartimentos Petri-placa: Optimización de la promoción del crecimiento y resistencia inducida en pepinos expuestos a volátiles bacterianos gaseosos en un sistema de invernadero en miniatura. Métodos vegetales. 15 (1): 1-11.
- Ghivari S, Kubasad G, Deshpande P. 2012. Evaluación comparativa de la extrusión apical de bacterias utilizando sistemas manuales y rotativos: un estudio in vitro. Revista de odontología conservadora. 15 (1): 32-35.
- Jones D, Smith H, Thieme H, Röst G. 2012. Sobre la propagación de la infección por fagos de bacterias en una placa de Petri. Revista SIAM de Matemáticas Aplicadas, 72 (2): 670-688.
- Kabanova N, Stulova I, Vilu R. 2013. Estudio microcalorimétrico del crecimiento de Lactococcus lactis IL1403 a baja concentración de glucosa en líquidos y geles de agar sólidos. Thermochimica Acta, 559: 69-75.
- Nottingham P, Rushbrook A, Jury K. 1975. El efecto de la técnica de placa y la temperatura de incubación sobre los recuentos bacterianos. IFST. 10 (3): 273-279.
- Safwat, N. 2013. Automatización y más allá: Mejora de la eficiencia en el camino desde la recolección hasta la atención. Observador de laboratorio médico. 45 (1).
- Tomasino S, Pines R, Cottrill M, Hamilton M. 2008. Determinación de la eficacia de los esporicidas líquidos contra las esporas de Bacillus subtilis en una superficie dura no porosa utilizando el método cuantitativo de tres pasos: estudio colaborativo. Revista de AOAC International, 91 (4): 833-852.
- Wang Z, Liu Y, Feng C, Wang C. 2016. Aislamiento e identificación de saccharomycetes en la región de uvas de vino de Chateau Changyu Moser XV. Ciencia y tecnología agrícolas. 17 (12): 2689-2691,2700.
enlaces externos
- Método de placa de agar en estrías para obtener colonias aisladas (video).