La tecnología Streptamer permite el aislamiento reversible y la tinción de células T específicas de antígeno . Esta tecnología combina un método de aislamiento de células T actual con la tecnología Strep-tag . En principio, las células T se separan estableciendo una interacción específica entre la célula T de interés y una molécula que se conjuga a un marcador, lo que permite el aislamiento. La reversibilidad de esta interacción y el hecho de que se realice a bajas temperaturas es la razón del éxito del aislamiento y caracterización de las células T funcionales. Debido a que las células T siguen siendo fenotípica y funcionalmente indistinguibles de las células no tratadas, este método ofrece nuevas estrategias en la investigación clínica y básica de células T. [1]
Las células T juegan un papel importante en el sistema inmunológico adaptativo . Son capaces de orquestar, regular y coordinar respuestas inmunes complejas. Una amplia gama de aspectos clínicamente relevantes están asociados con la función o mal funcionamiento de las células T: enfermedades autoinmunes , control de patógenos virales o bacterianos , desarrollo de cáncer o respuestas de injerto contra huésped. En los últimos años, se han desarrollado varios métodos ( ensayo ELISpot , tinción de citocinas intracelulares , ensayo de secreción ) para la identificación de células T, pero solo el complejo principal de histocompatibilidad Los procedimientos (MHC) permiten la identificación y purificación de células T específicas de antígeno independientemente de su estado funcional.
En principio, los procedimientos de MHC utilizan el ligando del receptor de células T (TCR), que es el complejo MHC-péptido, como sonda de tinción. El MHC interactúa con el TCR, que a su vez se expresa en las células T. Debido a que las interacciones TCR-MHC tienen solo una afinidad muy débil entre sí, los complejos monoméricos MHC-epítopo no pueden proporcionar una unión estable. Este problema puede resolverse utilizando epítopos de MHC multimerizados, lo que aumenta la avidez de unión y, por lo tanto, permite una unión estable. Los fluorocromos conjugados con los multímeros del MHC se pueden usar para la identificación de células T mediante citometría de flujo.. Hoy en día, las moléculas de MHC se pueden producir de forma recombinante junto con los péptidos antigénicos que son conocidos por un número de enfermedades en rápido crecimiento.
El principio de tinción Streptamer combina el método clásico de aislamiento de células T mediante multímeros MHC con la tecnología Strep-tag / Strep-Tactin . El Strep -tag es una secuencia de péptidos corta que muestra una afinidad de unión moderada por la biotina.sitio de unión de una molécula de estreptavidina mutada, llamada Strep-Tactin. Para la tecnología Streptamer, las moléculas de Strep-Tactin están multimerizadas y forman la "columna vertebral", creando así una plataforma para unirse a proteínas etiquetadas con estreptococos. Además, el esqueleto de Strep-Tactin tiene una etiqueta fluorescente para permitir el análisis de citometría de flujo. La incubación de las proteínas de fusión MHC-Strep-tag con el esqueleto de Strep-Tactin da como resultado la formación de un MHC-multímero, que es capaz de teñir las células T con un antígeno específico.
Debido a que la molécula d-biotina tiene una afinidad mucho mayor por Strep-Tactin que Strep-tag, puede competir eficazmente por el sitio de unión. [2] [3] Por lo tanto, un multímero MHC basado en la interacción de Strep-tag con Strep-Tactin se altera fácilmente en presencia de concentraciones relativamente bajas de d-biotina. Sin el esqueleto Strep-Tactin, las proteínas de fusión MHC-Strep-tag individuales se separan espontáneamente del TCR de la célula T, debido a afinidades de unión débiles (los complejos monoméricos MHC-epítopo no pueden proporcionar unión estable, ver más arriba).