SNAP-tag® es una etiqueta de proteína auto-etiquetada disponible comercialmente en varios vectores de expresión. La etiqueta SNAP es un polipéptido de 182 residuos (19,4 kDa) que se puede fusionar con cualquier proteína de interés y, además, se puede etiquetar de forma específica y covalente con un ligando adecuado, como un tinte fluorescente . Desde su introducción, SNAP-tag ha encontrado numerosas aplicaciones en bioquímica y para la investigación de la función y localización de proteínas y enzimas en células vivas. [1] En comparación con los métodos de etiquetado estándar actuales utilizados en microscopía de fluorescencia, el uso de la etiqueta SNAP presenta ventajas significativas. SNAP-tag® es una marca registrada de New England Biolabs, Inc.
Aplicaciones
La biología celular utiliza herramientas que permiten la manipulación y visualización de proteínas en células vivas. Un ejemplo importante es el uso de proteínas fluorescentes, como la proteína verde fluorescente (GFP) o la proteína amarilla fluorescente (YFP). Los métodos de biología molecular permiten que estas proteínas fluorescentes se introduzcan y expresen en células vivas como proteínas de fusión. Sin embargo, las propiedades fotofísicas de las proteínas fluorescentes generalmente no son adecuadas para la espectroscopia de molécula única. Las proteínas fluorescentes tienen, en comparación con los colorantes disponibles comercialmente, un rendimiento cuántico de fluorescencia mucho menor y se destruyen rápidamente tras la excitación con un rayo láser enfocado (fotoblanqueo).
La proteína SNAP-tag® es una versión diseñada de la omnipresente enzima de mamíferos AGT, [2] codificada en humanos por el gen O-6-metilguanina-ADN metiltransferasa (MGMT). La etiqueta SNAP se obtuvo utilizando una estrategia de evolución dirigida, [3] que conduce a una variante de hAGT que acepta derivados de O 6 -bencilguanina en lugar de reparar derivados de guanina alquilados en el ADN dañado.
Se diseñó además una etiqueta ortogonal, denominada CLIP-tag ™, a partir de SNAP-tag para aceptar derivados de O 2 -bencilcitosina como sustratos, en lugar de O 6 -bencilguanina. [4] Posteriormente se desarrolló una versión de etiqueta SNAP dividida adecuada para ensayos de complementación de proteínas y estudios de interacción proteína-proteína. [5]
Además de la microscopía de fluorescencia , SNAP-tag y CLIP-tag han demostrado ser útiles en la elucidación de numerosos procesos biológicos, incluida la identificación de complejos multiproteicos utilizando varios enfoques como FRET , [6] entrecruzamiento, [6] ensayo de ligadura de proximidad . [7] Otras aplicaciones incluyen la medición de la vida media de las proteínas in vivo, [8] y las interacciones entre moléculas pequeñas y proteínas. [9] SNAP-tag® es una marca comercial registrada de New England Biolabs, Inc. CLIP-tag ™ es una marca comercial de New England Biolabs, Inc.
Ver también
Referencias
- ^ Crivat G; Taraska JW (enero de 2012). "Imágenes de proteínas dentro de las células con etiquetas fluorescentes" . Tendencias en biotecnología . 30 (1): 8–16. doi : 10.1016 / j.tibtech.2011.08.002 . PMC 3246539 . PMID 21924508 .
- ^ Juillerat A; Gronemeyer T; Keppler A; Gendreizig S; Elija H; Vogel H; Johnsson K (abril de 2003). "Evolución dirigida de O6-alquilguanina-ADN alquiltransferasa para el etiquetado eficiente de proteínas de fusión con moléculas pequeñas in vivo" . Química y Biología . 10 (4): 313–317. doi : 10.1016 / S1074-5521 (03) 00068-1 . PMID 12725859 .
- ^ Mollwitz, Birgit; Brunk, Elizabeth; Schmitt, Simone; Pojer, Florencia; Bannwarth, Michael; Schiltz, Marc; Rothlisberger, Ursula; Johnsson, Kai (7 de febrero de 2012). "Evolución dirigida de la proteína suicida O6-alquilguanina-ADN alquiltransferasa para resultados de reactividad aumentada en una proteína alquilada con estabilidad excepcional" . Bioquímica . 51 (5): 986–994. doi : 10.1021 / bi2016537 . ISSN 0006-2960 . PMID 22280500 .
- ^ Gautier A; Juillerat A; Heinis C; Corrêa IR Jr; Kindermann M; Beaufils F; Johnsson K (febrero de 2008). "Una etiqueta de proteína diseñada para el etiquetado de multiproteínas en células vivas" . Química y Biología . 15 (2): 128-136. doi : 10.1016 / j.chembiol.2008.01.007 . PMID 18291317 .
- ^ Mie M; Naoki T; Uchida K; Kobatake E (octubre de 2012). "Desarrollo de un ensayo de complementación de proteínas de etiqueta SNAP dividida para la visualización de interacciones proteína-proteína en células vivas" . Analista . 137 (20): 4760–4765. doi : 10.1039 / c2an35762c . PMID 22910969 . S2CID 6217675 .
- ^ a b Maurel D; Comps-Agrar L; Brock C; Rives ML; Bourrier E; Ayoub MA; Bazin H; Tinel N; Durroux T; Prézeau L; Trinquet E; Pin JP (junio de 2008). "Análisis de interacción proteína-proteína de superficie celular con tecnologías FRET y snap-tag resueltas en el tiempo: aplicación a la oligomerización de GPCR" . Métodos de la naturaleza . 5 (6): 561–567. doi : 10.1038 / nmeth.1213 . PMC 2642604 . PMID 18488035 .
- ^ Gu GJ; Friedman M; Jost C; Johnsson K; Kamali-Moghaddam M; Plückthun A; Landegren U; Söderberg O (enero de 2013). "Conjugación de oligonucleótidos mediada por etiquetas de proteínas con ligantes de afinidad recombinantes para la ligadura de proximidad" . Nueva biotecnología . 30 (2): 144-152. doi : 10.1016 / j.nbt.2012.05.005 . PMID 22664266 .
- ^ Bodor DL; Rodríguez MG; Moreno N; Jansen LE (junio de 2012). Análisis de la rotación de proteínas mediante imágenes cuantitativas de persecución de pulsos basadas en SNAP . Protocolos actuales en biología celular . 55 . págs. Unidad8.8. doi : 10.1002 / 0471143030.cb0808s55 . hdl : 10400,7 / 614 . ISBN 978-0471143031. PMID 23129118 .
- ^ Chidley C; Haruki H; Pedersen MG; Muller E; Johnsson K (junio de 2011). "Una pantalla a base de levadura revela que la sulfasalazina inhibe la biosíntesis de tetrahidrobiopterina" . Biología química de la naturaleza . 7 (6): 375–383. doi : 10.1038 / nchembio.557 . PMID 21499265 .
Otras lecturas
- Keppler A; Kindermann M; Gendreizig S; Elija H; Vogel H; Johnsson K (2004). "Marcado de proteínas de fusión de O6-alquilguanina-ADN alquiltransferasa con pequeñas moléculas in vivo e in vitro". Métodos . 32 (4): 437–444. doi : 10.1016 / j.ymeth.2003.10.007 . PMID 15003606 .
- Keppler A; Elija H; Arrivoli C; Vogel H; Johnsson K (2004). "Marcado de proteínas de fusión con fluoróforos sintéticos en células vivas" . Proc. Natl. Acad. Sci. USA . 101 (27): 9955–9959. doi : 10.1073 / pnas.0401923101 . PMC 454197 . PMID 15226507 .
- Juillerat A; Heinis C; Sielaff I; Barnikow J; Jaccard H; Kunz B; Terskikh A; Johnsson K (2005). "Ingeniería de la especificidad de sustrato de alquiltransferasa de O6-alquilguanina-ADN para el etiquetado de proteínas específicas en células vivas". ChemBioChem . 6 (7): 1263–1269. doi : 10.1002 / cbic.200400431 . PMID 15934048 . S2CID 23926764 .
enlaces externos
- Darstellung SNAP-Tag y CLIP-Tag (NEB)
- Etiquetas autoadhesivas de proteínas. En: Bioforum. Jg. 2005, Nr. 6, S. 50-51.