El escalonamiento del ADN es una característica que se puede observar cuando los fragmentos de ADN , resultantes de la fragmentación apoptótica del ADN , se visualizan después de la separación mediante electroforesis en gel . Fue descrito por primera vez en 1980 por Andrew Wyllie en la Facultad de Medicina de la Universidad de Edimburgo . [1] Los fragmentos de ADN también se pueden detectar en células que sufrieron necrosis, pero cuando estos fragmentos de ADN después de la separación se someten a electroforesis en gel, no se aprecia un patrón claro de "escalera". [2]
Degradación del ADN
La escalera de ADN es una característica distintiva del ADN degradado por la ADNasa activada por caspasa (CAD), que es un evento clave durante la apoptosis . CAD escinde el ADN genómico en las regiones enlazadoras internucleosómicas , lo que da como resultado fragmentos de ADN que son múltiplos de 180-185 pares de bases de longitud. [3] La separación de los fragmentos mediante electroforesis en gel de agarosa y la posterior visualización, por ejemplo, mediante tinción con bromuro de etidio , da como resultado un patrón característico de "escalera". Un método simple de extracción selectiva de ADN fragmentado de células apoptóticas sin la presencia de secciones de ADN de alto peso molecular, que genera el patrón en escalera, utiliza el pretratamiento de las células en etanol . [4]
Apoptosis y necrosis
Si bien la mayoría de las características morfológicas de las células apoptóticas son de corta duración, la escala de ADN se puede usar como método de lectura del estado final y, por lo tanto, se ha convertido en un método confiable para distinguir la apoptosis de la necrosis . [5] La escala de ADN también se puede utilizar para ver si las células sufrieron apoptosis en presencia de un virus. [6] Esto es útil porque puede ayudar a determinar los efectos que tiene un virus en una célula.
La escalera de ADN solo se puede utilizar para detectar la apoptosis durante las últimas etapas de la apoptosis. Esto se debe a que la fragmentación del ADN tiene lugar en una etapa posterior del proceso de apoptosis. [3] La escala de ADN se usa para probar la apoptosis de muchas células, y no es precisa para probar solo unas pocas células que cometieron apoptosis. [3] Para mejorar la precisión en las pruebas de apoptosis, se utilizan otros ensayos junto con la escala de ADN, como TEM y TUNEL. [3] Con las mejoras recientes en la escala de ADN, la escala de ADN se ha convertido en una técnica más confiable y razonable para usar cuando se detecta la apoptosis. [7] También es importante tener en cuenta que la escala de ADN se produce de manera diferente según el tipo de célula, por lo que puede haber cambios leves en el proceso de escala de ADN según la célula que se esté investigando. [8]
Ver también
Referencias
- ↑ Wyllie AH (10 de abril de 1980). "La apoptosis de timocitos inducida por glucocorticoides se asocia con la activación de endonucleasas endógenas". Naturaleza . 284 (5756): 555–556. Código Bibliográfico : 1980Natur.284..555W . doi : 10.1038 / 284555a0 . ISSN 0028-0836 . PMID 6245367 .
- ^ Kressel, M .; Groscurth, P. (1 de diciembre de 1994). "Distinción de muerte celular apoptótica y necrótica por marcaje in situ de ADN fragmentado". Investigación de células y tejidos . 278 (3): 549–556. doi : 10.1007 / s004410050244 . ISSN 0302-766X . PMID 7850865 .
- ^ a b c d Elmore, Susan (1 de enero de 2007). "Apoptosis: una revisión de la muerte celular programada" . Patología toxicológica . 35 (4): 495–516. doi : 10.1080 / 01926230701320337 . ISSN 0192-6233 . PMC 2117903 . PMID 17562483 .
- ^ Gong, J .; Traganos, F .; Darzynkiewicz, Z. (1994). "Un procedimiento selectivo para la extracción de ADN de células apoptóticas aplicable para electroforesis en gel y citometría de flujo". Bioquímica analítica . 218 (2): 314–9. doi : 10.1006 / abio.1994.1184 . PMID 8074286 .
- ^ Iwata M, Myerson D, Torok-Storb B, Zager RA (diciembre de 1994). "Una evaluación de la escalera de ADN tubular renal en respuesta a la privación de oxígeno y la lesión oxidante" . Revista de la Sociedad Americana de Nefrología . 5 (6): 1307-1313. ISSN 1046-6673 . PMID 7893995 .
- ^ Srivastava, Vikram; Rawall, Shweta; Vijayan, VK; Khanna, Madhu (1 de mayo de 2009). "Apoptosis inducida por virus de la influenza a: inhibición de la actividad de caspasa-3 y escalera de ADN mediante la suplementación con zinc en células HeLa cultivadas". The Indian Journal of Medical Research . 129 (5): 579–586. ISSN 0971-5916 . PMID 19675388 .
- ^ Rahbar Saadat, Yalda; Saeidi, Nazli; Zununi Vahed, Sepideh; Barzegari, Abolfazl; Barar, Jaleh (1 de enero de 2015). "Una actualización del ensayo de escalera de ADN para la detección de apoptosis" . BioImpacts . 5 (1): 25-28. doi : 10.15171 / bi.2015.01 . ISSN 2228-5652 . PMC 4401164 . PMID 25901294 .
- ^ Jiang, Ai-Liang; Cheng, Yanwei; Li, Jianyou; Zhang, Wei (31 de julio de 2008). "Una endonucleasa nuclear dependiente de zinc es responsable de la formación de escaleras de ADN durante la muerte celular programada inducida por sal en las células de la punta de la raíz del arroz". Revista de fisiología vegetal . 165 (11): 1134-1141. doi : 10.1016 / j.jplph.2007.12.008 . ISSN 1618-1328 . PMID 18295371 .
Otras lecturas
Yeung, MC (2002). "Protocolo de escalera de ADN apoptótico acelerado" . BioTechniques . 33 (4): 734–736. doi : 10.2144 / 02334bm03 . PMID 12398177 .