La enzima Endoglicosidasa H ( EC 3.2.1.96 , Endo-β-N-acetilglucosaminidasa H , N, N'-diacetilchitobiosil beta-N-acetilglucosaminidasa , manosil-glicoproteína endo-beta-N-acetilglucosamidasa , di-N- acetil -Nitobiosil -acetilglucosaminidasa , endo-beta-acetilglucosaminidasa , endo-beta- (1-> 4) -N-acetilglucosaminidasa , manosilglicoproteína 1,4-N-acetamidodesoxi-beta-D-glucohidrolasa , endoglicosidasa S , endo-N-acetil- beta-D-glucosaminidasa , endo-N-acetil-beta-glucosaminidasa , endo-beta-N-acetilglucosaminidasa D, endo-beta-N-acetilglucosaminidasa F , endo-beta-N-acetilglucosaminidasa H , endo-beta-N-acetilglucosaminidasa L , glicopéptido-D-manosil-4-N- (N-acetil-D-glucosaminil) 2-asparagina 1,4-N-acetil-beta-glucosaminohidrolasa , endoglicosidasa H ) es una enzima con nombre sistemático glucopéptido-D-manosil-N4- (N-acetil-D-glucosaminil) 2-asparagina 1,4-N-acetil-beta -glucosaminohidrolasa . [1] [2] [3] [4] [5] [6] Es una endoglicosidasa altamente específica que escinde oligosacáridos ricos en manosa ligados a asparagina, pero no oligosacáridos complejos altamente procesados de glicoproteínas . Se utiliza con fines de investigación para desglicosilar glicoproteínas.
La endoglicosidasa H se aísla de Streptomyces plicatus o Streptomyces griseus . Su peso molecular es de 29 000 Dalton. Robbins 1984 describe la estructura primaria [7].
La endoglicosidasa H escinde el enlace en el núcleo de diacetilchitobiosa del oligosacárido entre dos subunidades de N-acetilglucosamina (GlcNAc) directamente próximas al residuo de asparagina, generando una molécula de azúcar truncada con un residuo de N-acetilglucosamina restante en la asparagina. [8]
Desglicosila las glicoproteínas de manosa, pero el grado y la velocidad de la desglicosilación dependen en gran medida de la naturaleza de las glicoproteínas. La velocidad de desglicosilación puede aumentarse mediante la desnaturalización de las glicoproteínas (por ejemplo, mediante carboximetilación, sulfitólisis o calentando en presencia de dodecilsulfato de sodio). La adición de 2-mercaptoetanol 0,1 M aumenta en gran medida la actividad enzimática contra las glicoproteínas que contienen puentes disulfuro intermoleculares o intramoleculares, a diferencia de los detergentes como Triton X-100, n-octilglucósido o detergentes zwiteriónicos. [9]
La endoglicosidasa H (Endo H) es comúnmente utilizada por biólogos celulares para monitorear la modificación postraduccional en el aparato de Golgi . La mayoría de las proteínas destinadas a la superficie celular son trasladadas por los ribosomas al retículo endoplásmico rugoso (RE) y trasladadas al aparato de Golgi. Al ingresar al RE, una molécula que contiene 14 subunidades de azúcar se une en bloque a una asparagina de manera selectiva por la enzima oligosacaril transferasa. Es esta molécula de oligosacárido la que es modificada por una serie de enzimas a medida que la proteína se mueve a través de los diferentes compartimentos del aparato de Golgi. La endoglicosidasa H es capaz de escindir cada estructura de este oligosacárido a medida que se procesa hasta que la enzima Golgi alfa-manosidasa II elimina dos subunidades de manosa . Dado que todas las estructuras de oligosacáridos posteriores son resistentes a la escisión de Endo H, la enzima se usa ampliamente para informar del grado de procesamiento de oligosacáridos que ha experimentado una proteína de interés. [10]