FlAsH-EDT2
FlAsH-EDT 2 es un compuesto organoarsénico con fórmula molecular C 24 H 18 As 2 O 5 S 4 . Su estructura se basa en un núcleo de fluoresceína con dos sustituyentes 1,3,2-ditiarsolano . Se utiliza en la investigación bioanalítica como etiqueta fluorescente para visualizar proteínas en células vivas. [1] FlAsH-EDT 2 es una abreviatura de fl uorescin a r s enical h airpin binder - e thaned i t hiol , y es un sólido fluorogénico de color amarillo pálido o rosado. Tiene una fórmula semiestructural (C 2 H 4 AsS 2 ) 2 - (C 13 H 5 O 3 ) -C 6 H 4 COOH, que representa los sustituyentes de ditiarsolano unidos alnúcleo dehidroxi xantona , unidos a unamolécula o- sustituida de ácido benzoico .
FLASH-EDT 2 se utiliza para el marcaje específico de sitio, unirse de forma selectiva a las proteínas que contienen el tetra cisteína (TC) motivo Cys-Cys-xxx-xxx-Cys-Cys y convertirse en fluorescente cuando se une. Muestra una unión no específica a proteínas endógenas ricas en cisteína, lo que significa que se une a sitios distintos al de interés (CCXXCC). Una mayor optimización del motivo TC ha revelado una afinidad de unión de FlAsH mejorada por un motivo CCPGCC, [2] y un mayor rendimiento cuántico cuando el motivo tetracisteína está flanqueado por residuos específicos (HRWCCPGCCKTF o FLNCCPGCCMEP). [3]
Muchos estudios muestran que los compuestos de arsénico trivalente se unen a pares de residuos de cisteína. Esta unión es responsable de la toxicidad de muchos compuestos de arsénico. [4] La unión es revertida por el 1,2-etanoditiol, que se une fuertemente a los compuestos de arsénico, como lo demuestra la estabilidad de FlAsH-EDT 2 . [5] Este fuerte enlace azufre-arsénico puede regularse, nuevamente, mediante el diseño de un dominio peptídico que exhiba una mayor afinidad hacia el arsénico, como el motivo tetracisteína. Modulando la distancia entre los dos pares de residuos de cisteína y el espacio entre los centros de arsénico de FlAsH-EDT 2 , podría lograrse un enlace ditiol arsénico cooperativo y favorecido entrópicamente. [6]
Por tanto, la unión de FlAsH-EDT 2 está sujeta a equilibrio. La formación del aducto del péptido FlAsH puede favorecerse en concentraciones bajas de EDT (por debajo de 10 µM ) y revertirse en concentraciones altas de EDT (por encima de 1 mM). [6]
FlAsH se vuelve fluorescente tras la unión del motivo tetracisteína. Se excita a 508 nm y emite 528 nm, un verde-amarillo, de fluoresceína libre. El rendimiento cuántico es 0,49 para FlAsH 250 nM unido a un péptido que contiene tetracisteína modelo en una solución salina tamponada con fosfato a pH 7,4. [6]
Generalmente, FlAsH-EDT 2 tiene eficiencias cuánticas de fluorescencia de 0,1 a 0,6 con varios límites de detección μM para la etiqueta citosólica difusa y coeficientes de extinción de 30 a 80 L mmol -1 cm -1 . El complejo FlAsH-péptido también ha demostrado la transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET) de proteínas fluorescentes, como la proteína fluorescente cian mejorada (ECFP) de la proteína fluorescente verde (GFP). [7]
