Las endonucleasas flap (FEN, también conocidas como nucleasas 5 ' en referencias anteriores) son una clase de enzimas nucleolíticas que actúan como exonucleasas 5'-3' y endonucleasas específicas de estructura en estructuras de ADN especializadas que se producen durante los procesos biológicos de replicación del ADN . Reparación de ADN y recombinación de ADN. Se han identificado endonucleasas de colgajo en eucariotas , procariotas , arqueas y algunos virus . Los organismos pueden tener más de un homólogo de FEN; esta redundancia puede dar una indicación de la importancia de estas enzimas. En los procariotas, la enzima FEN se encuentra como un dominio N-terminal de la ADN polimerasa I, pero algunos procariotas parecen codificar un segundo homólogo. [1] [2] [3]
La actividad endonucleasa de las FEN se identificó inicialmente como actuando sobre un dúplex de ADN que tiene un saliente 5 'monocatenario en una de las hebras [4] (denominado "colgajo 5", de ahí el nombre de endonucleasa colgajo [5] ). Los FEN catalizan la escisión hidrolítica del enlace fosfodiéster en la unión del ADN monocatenario y bicatenario. [6] Algunas FEN también pueden actuar como exonucleasas 5'-3 'en el extremo 5' de la hebra de la aleta y en sustratos de ADN 'mellados' .
Los modelos de estructura de proteínas basados en datos de cristalografía de rayos X sugieren que las FEN tienen un arco flexible creado por dos hélices α a través de las cuales se puede enhebrar la única hebra 5 'de la estructura del colgajo 5'. [7]
Las endonucleasas de colgajo se han utilizado en biotecnología , por ejemplo, el ensayo Taqman PCR [8] y el ensayo Invader para la detección de mutaciones y polimorfismos de un solo nucleótido (SNP). [9] [10]
Ver también
Referencias
- ^ Sayers, Jon R. (1994). "Identificación asistida por ordenador de un gen potencial de exonucleasa 5′-3 ′ codificado por Escherichia coli". Revista de Biología Teórica . 170 (4): 415-21. doi : 10.1006 / jtbi.1994.1202 . PMID 7996866 .
- ^ Liu, Yuan; Kao, Hui-I; Bambara, Robert A. (2004). "FLAP ENDONUCLEASE 1: Un componente central del metabolismo del ADN". Revisión anual de bioquímica . 73 : 589–615. doi : 10.1146 / annurev.biochem.73.012803.092453 . PMID 15189154 .
- ^ Ceska, T; Sayers, JR (1998). "Escisión de ADN de estructura específica por 5 'nucleasas". Tendencias en Ciencias Bioquímicas . 23 (9): 331–6. doi : 10.1016 / S0968-0004 (98) 01259-6 . PMID 9787638 .
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- ^ Harrington, John J .; Lieber, Michael R. (1994). "La caracterización de una endonucleasa específica de estructura de ADN de mamífero" . El diario EMBO . 13 (5): 1235–46. doi : 10.1002 / j.1460-2075.1994.tb06373.x . PMC 394933 . PMID 8131753 .
- ^ Kaiser, Michael W .; Lyamicheva, N .; Ma, W .; Miller, C .; Neri, B .; Fors, L .; Lyamichev, V. (1999). "Una comparación de 5'-exonucleasas específicas de estructura de arqueas y eubacterianas" . Revista de Química Biológica . 274 (30): 21387–21394. doi : 10.1074 / jbc.274.30.21387 . PMID 10409700 .
- ^ Ceska, TA; Sayers, JR; Stier, G .; Suck, D. (1996). "Un arco helicoidal que permite que el ADN monocatenario pase a través de T5 5'-exonucleasa". Naturaleza . 382 (6586): 90–3. Código Bibcode : 1996Natur.382 ... 90C . doi : 10.1038 / 382090a0 . PMID 8657312 . S2CID 11159640 .
- ^ http://www.med.unc.edu/anclinic/Tm.htm [ se necesita cita completa ]
- ^ Lyamichev, V .; Mast, AL; Hall, JG; Prudent, JR; Kaiser, MW; Takova, T .; Kwiatkowski, R .; Sander, T .; deArruda, M .; Arco, D .; Neri, BP; Brow, MA (1999). "Identificación de polimorfismo y detección cuantitativa de ADN genómico por escisión invasiva de sondas de oligonucleótidos". Biotecnología de la naturaleza . 17 (3): 292-296. doi : 10.1038 / 7044 . PMID 10096299 . S2CID 37888925 .
- ^ Olivier, Michael (2005). "El ensayo Invader® para genotipado de SNP" . Investigación de mutaciones / Mecanismos fundamentales y moleculares de mutagénesis . 573 (1–2): 103–10. doi : 10.1016 / j.mrfmmm.2004.08.016 . PMC 2771639 . PMID 15829241 .
enlaces externos
Enlace externo Endonucleasas flap, exonucleasas 5'-3 'y nucleasas 5'