Definición
LiMETER significa l ight- i nducible me mbrane- t ethered periférica e ndoplasmic r eticulum (ER).
Diseño
LiMETER es una herramienta optogenética diseñada para etiquetar reversiblemente ER cortical [1] o la aposición entre la membrana plasmática (PM) y las membranas del retículo endoplásmico (ER) (denominadas uniones ER-PM ).
El dominio luminal ER de LiMETER contiene un péptido señal y el dominio transmembrana derivado de STIM1 , [2] con GFP colocado en el medio como informador. STIM1 es una proteína sensora de calcio residente en ER responsable de detectar cambios de calcio en las reservas internas de calcio y comunicarse con los canales de calcio ORAI en la membrana plasmática. [3] [4] [5] [6] [7] [8] La región citoplásmica de LiMETER contiene un enlazador flexible y un dominio LOV2 de interruptor de luz codificado genéticamente (dominio sensor de voltaje de oxígeno ligero, residuos 404–546) derivado de Avena sativa fototropina 1, seguida de una cola polibásica C-terminal dirigida a PM que se asocia con fosfoinosítidos cargados negativamente en la mitad interna de la valva de la membrana plasmática. [1]
Función
En la oscuridad, la hélice Jα se acopla al dominio LOV2 y enjaula la cola polibásica para evitar su interacción con fosfoinosítidos residentes en PM cargados negativamente. Después de la iluminación con luz azul, la fotoexcitación genera un aducto covalente entre un residuo de cisteína y el cofactor flavina en LOV2, y posteriormente promueve el desacoplamiento y desenrollado de la hélice Jα, exponiendo así la cola C polibásica para permitir la translocación de la proteína hacia la formación de PM estructuras de tipo puncta.
Como resultado, LiMETER sufre una translocación fotoinducible hacia las uniones ER-PM para etiquetar específicamente el cER. Puede encontrar un video que muestra este proceso aquí . Este proceso se puede repetir de forma reversible con múltiples ciclos de luz y oscuridad sin una pérdida significativa en la magnitud de la respuesta. [1]
Esta herramienta óptica permite a los biólogos celulares examinar cuantitativamente el efecto de los reguladores que modulan la dinámica de la acumulación de cER a una resolución espacio-temporal definida en células vivas.
Referencias
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