La N- etilmaleimida ( NEM ) es un compuesto orgánico derivado del ácido maleico . Contiene el grupo funcional amida , pero lo más importante es que es un alqueno que es reactivo frente a los tioles y se usa comúnmente para modificarresiduos de cisteína en proteínas y péptidos . [2]
Nombres | |
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Nombre IUPAC preferido 1-etil-1 H -pirrol-2,5-diona | |
Otros nombres Etilmaleimida | |
Identificadores | |
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Modelo 3D ( JSmol ) | |
Abreviaturas | NEM |
112448 | |
CHEBI | |
CHEMBL | |
ChemSpider | |
DrugBank | |
Tarjeta de información ECHA | 100.004.449 |
Número CE |
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405614 | |
KEGG | |
PubChem CID | |
UNII | |
Tablero CompTox ( EPA ) | |
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Propiedades | |
C 6 H 7 NO 2 | |
Masa molar | 125.12528 |
Punto de fusion | 43 a 46 ° C (109 a 115 ° F; 316 a 319 K) |
Punto de ebullición | 210 ° C (410 ° F; 483 K) |
Peligros | |
Pictogramas GHS | |
Palabra de señal GHS | Peligro |
Declaraciones de peligro GHS | H300 , H301 , H311 , H314 , H317 |
Consejos de prudencia del SGA | P260 , P261 , P264 , P270 , P272 , P280 , P301 + 310 , P301 + 330 + 331 , P302 + 352 , P303 + 361 + 353 , P304 + 340 , P305 + 351 + 338 , P310 , P312 , P321 , P322 , P330 , P333 + 313 , P361 , P363 , P405 , P501 |
Salvo que se indique lo contrario, los datos se proporcionan para materiales en su estado estándar (a 25 ° C [77 ° F], 100 kPa). | |
verificar ( ¿qué es ?) | |
Referencias de Infobox | |
Química Orgánica
NEM es un Michael Acceptor en Michael Reaction , lo que significa que agrega nucleófilos como los tioles. El tioéter resultante presenta un fuerte enlace CS y la reacción es prácticamente irreversible. La reacción con tioles se produce en el rango de pH de 6,5 a 7,5, el NEM puede reaccionar con aminas o sufrir hidrólisis a un pH más alcalino. NEM se ha utilizado ampliamente para investigar el papel funcional de los grupos tiol en enzimología . La NEM es un inhibidor irreversible de todas las cisteína peptidasas , y la alquilación se produce en el grupo tiol del sitio activo (ver esquema). [3] [4]
Estudios de caso
NEM bloquea el transporte vesicular . En tampones de lisis, se utilizan de 20 a 25 mM de NEM para inhibir la desumoilación de proteínas para el análisis de Western Blot . NEM también se ha utilizado como inhibidor de deubiquitinasas.
Arthur Kornberg y sus colegas utilizaron N- etilmaleimida para eliminar la ADN polimerasa III con el fin de comparar su actividad con la de la ADN polimerasa I (pol III y I, respectivamente). Kornberg había sido galardonado con el Premio Nobel por descubrir la pol I, que entonces se creía que era el mecanismo de replicación del ADN bacteriano , aunque en este experimento demostró que la pol III era la verdadera maquinaria de replicación.
NEM activa la salida de K dependiente de Cl insensible a la ouabaína en glóbulos rojos de oveja y cabra con bajo contenido de K. [5] Este descubrimiento contribuyó a la identificación molecular del cotransporte de K-Cl (KCC) en células embrionarias humanas transfectadas por el cDNA de la isoforma KCC1, 16 años después. [6] Desde entonces, NEM se ha utilizado ampliamente como herramienta de diagnóstico para descubrir o manipular la presencia de cotransporte de K-Cl en la membrana en células de muchas especies del reino animal. [7] A pesar de los repetidos intentos fallidos de identificar químicamente el grupo tiol diana, [8] a pH fisiológico, la NEM puede formar aductos con tioles dentro de las proteínas quinasas que fosforilan el KCC en residuos específicos de serina y treonina principalmente dentro del dominio C-terminal del transportador . [9] La consiguiente desfosforilación de KCC por las proteínas fosfatasas conduce a la activación de KCC. [10]
Referencias
- ^ N-etilmaleimida en Sigma-Aldrich
- ^ Sondas reactivas de tiol Archivado el 28 de enero de 2008 en la Wayback Machine en Invitrogen
- ^ Nelson, DL; Cox, MM "Lehninger, Principios de bioquímica" 3ª Ed. Worth Publishing: Nueva York, 2000. ISBN 1-57259-153-6 .
- ^ Gregory, JD (1955) J. Am. Chem. Soc. 77, 3922-3923
- ^ Un flujo de K + dependiente de cloruro inducido por N etilmaleimida en eritrocitos de oveja y cabra genéticamente bajos en K +. PK Lauf y BE Theg. Biochem. Biophys. Res. Comun., 92: 1422, 1980
- ^ Gillen CM, Brill S, Payne JA, Forbush B 3rd: Clonación molecular y expresión funcional del cotransportador K-Cl de conejo, rata y ser humano. Un nuevo miembro de la familia de cotransportadores catión-cloruro. J. Biol Chem. 5 de julio de 1996; 271 (27): 16237-44
- ^ Regulación del cotransporte de K-Cl: de la función a los genes. NC Adragna, M. Di Fulvio y PK Lauf, J. Biología de la membrana, 200: 1-29, 2004
- ^ Cotransporte de K + Cl: Sulfhidrilo, cationes divalentes y el mecanismo de activación de volumen en un glóbulo rojo. PK Lauf. Revisión de temas, J. Memb. Biol. 88: 1 13, 1985
- ^ Rinehart, J; Maksimova, YD; Tanis, JE; Stone, KL; Hodson, CA; Zhang, J; Risinger, M; Pan, W; Wu, D; Colangelo, CM; Forbush, B; Joiner, CH; Gulcicek, EE; Gallagher, PG; Lifton, RP (2009). "Sitios de fosforilación regulada que controlan la actividad del cotransportador de K-Cl" . Celular . 138 (3): 525–536. doi : 10.1016 / j.cell.2009.05.031 . PMC 2811214 . PMID 19665974 .
- ^ Jennings, ML y Al-Rohil, gen de NSJ. Physiol. 95, 1021-1040, 1990
enlaces externos
- La base de datos en línea MEROPS para peptidasas y sus inhibidores: NEM [ enlace muerto permanente ]
- Los análogos bifuncionales tales como p-NN'-fenilenbismaleimida pueden usarse como reactivo de reticulación para residuos de cistina. ver Lutter, LC, Zeichhardt, H., Kurland, CG & Stoffier, G. (1972) Mol. Gen. Genet. 119, 357-366.