El plásmido pGLO es un plásmido modificado que se utiliza en biotecnología como vector para crear organismos modificados genéticamente . El plásmido contiene varios genes indicadores , más notablemente la proteína verde fluorescente (GFP) y el gen de resistencia a ampicilina. Se aisló GFP de la medusa Aequorea victoria . Debido a que comparte un promotor bidireccional con un gen para metabolizar la arabinosa , el gen GFP se expresa en presencia de arabinosa, lo que hace que el organismo transgénico exprese su fluorescencia bajo luz ultravioleta.. La GFP se puede inducir en bacterias que contienen el plásmido pGLO haciéndolas crecer en placas de + arabinosa. pGLO está fabricado por Bio-Rad Laboratories .
Estructura
pGLO está formado por tres genes que se unen mediante tecnología de ADN recombinante. Son los siguientes:
- Bla, que codifica la enzima beta-lactamasa que otorga a las bacterias transformadas resistencia a la familia de antibióticos beta-lactámicos (como los de la familia de las penicilinas )
- araC, una región promotora que regula la expresión de GFP (específicamente, el gen GFP se expresará solo en presencia de arabinosa )
- GFP, la proteína verde fluorescente, que da un brillo verde si las células producen este tipo de proteína.
Como la mayoría de los otros plásmidos circulares, el plásmido pGLO contiene un origen (ori), que es una región del plásmido donde se originará la replicación. El plásmido pGLO se hizo famoso por investigadores en Francia que lo utilizaron para producir un conejo verde fluorescente llamado Alba .
Otras características de pGLO, como la mayoría de los otros plásmidos, incluyen: un marcador seleccionable, Ori ( origen de replicación ) y un MCS ( sitio de clonación múltiple ) ubicado al final del gen GFP. El plásmido tiene una longitud de 5371 pares de bases . En forma superenrollada , se ejecuta en un gel de agarosa en el rango 4200–4500. [1] [2] [3]
Descubrimiento de GFP
El gen GFP fue observado por primera vez por Osamu Shimomura [4] y su equipo en 1962 mientras estudiaban las medusas Aequorea victoria que tienen un anillo de luz azul bajo su paraguas . Shimomura y su equipo aislaron la proteína aequorina de miles de medusas hasta que reunieron lo suficiente para un análisis completo de la proteína. Fue a través del estudio de la aequorina que Shimomura descubrió pequeñas cantidades de GFP que se ilumina en verde cuando la aequorina emite luz azul. Después de descubrir con éxito cómo funciona la GFP con la aequorina en las medusas, la dejó a un lado para estudiar la bioluminiscencia en otros organismos.
En 1994, Marty Chalfie [4] y su equipo pudieron crear con éxito bacterias y gusanos redondos que expresan la proteína GFP. Poco después, Roger Tsien [5] y su equipo pudieron crear GFP mutante que puede emitir una variedad de colores, no solo el verde.
Los tres científicos tienen el Premio Nobel de Química de 2008 [6] por el descubrimiento y desarrollo de la proteína verde fluorescente, GFP.
Referencias
- ^ "Electroforesis de proteínas Biotechnology Explorer ™ de GFP: una extensión del kit de transformación bacteriana pGLO ™" (PDF) . Archivado desde el original (PDF) el 24 de febrero de 2012.
- ^ Eichbaum QG, Iyer R, Raveh DP, Mathieu C, Ezekowitz RA (junio de 1994). "La restricción de la capacidad de respuesta al interferón gamma y la expresión basal del gen mieloide humano Fc gamma R1b está mediada por un sitio PU.1 funcional y un consenso de iniciador de la transcripción" . La Revista de Medicina Experimental . 179 (6): 1985–96. doi : 10.1084 / jem.179.6.1985 . PMC 2191524 . PMID 8195721 .
- ^ Eichbaum Q, Heney D, Raveh D, Chung M, Davidson M, Epstein J, Ezekowitz RA (noviembre de 1997). "El promotor del receptor de manosa de macrófagos murinos está regulado por los factores de transcripción PU.1 y SP1" . Sangre . 90 (10): 4135–43. doi : 10.1182 / sangre.V90.10.4135 . PMID 9354684 .
- ^ a b Ferry, Georgina (2018). "Osamu Shimomura" . Naturaleza . 563 : 627. doi : 10.1038 / d41586-018-07401-1 . S2CID 53775369 - a través de Gale en Context: Science.
- ^ "Historia de la proteína verde fluorescente" . Conncoll.edu .
- ^ "El Premio Nobel de Química 2008" . NobelPrize.org . Consultado el 19 de octubre de 2020 .