La ribonucleasa T ( RNasa T , exonucleasa T , exo T ) es una enzima ribonucleasa involucrada en la maduración del ARN de transferencia y del ARN ribosómico en bacterias , [2] así como en las vías de reparación del ADN . [3] Es un miembro de la familia de exonucleasas DnaQ y actúa de forma no procesadora en el extremo 3 ' de los ácidos nucleicos monocatenarios . La RNasa T es capaz de escindir tanto el ADN como el ARN. , con una especificidad de secuencia extrema que discrimina contra la citosina en el extremo 3 'del sustrato . [1] [2]
Ribonucleasa T | ||||||||
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Identificadores | ||||||||
Símbolo | rnt | |||||||
Pfam | PF00929 | |||||||
InterPro | IPR013520 | |||||||
INTELIGENTE | SM00479 | |||||||
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Estructura y mecanismo
La ARNasa T cataliza la eliminación de nucleótidos del extremo 3 'tanto del ARN como del ADN. Es inhibido por ADN y ARN de doble hebra, así como por residuos de citosina en el extremo 3 'del ARN. Dos citosinas en el extremo 3 'del ARN parecen eliminar la actividad de la ARNasa T por completo. [3] Este efecto de citosina, sin embargo, se observa menos con ssDNA. Esta falta de especificidad de secuencia en el ssDNA, combinada con su capacidad para actuar sobre el ssDNA cerca de una región dúplex, ha llevado a su uso en la creación de extremos romos para la clonación de ADN. [4] Estructuralmente, la ARNasa T existe como un dímero antiparalelo [5] [6] y requiere un catión divalente para funcionar. [7]
La ARNasa T es capaz de lograr su especificidad de secuencia en la digestión del ARN a través de varios residuos aromáticos que se intercalan entre bases nucleicas. Las interacciones π -π entre cuatro residuos de fenilalanina y los dos nucleótidos en el extremo 3 'son diferentes dependiendo de la identificación de los nucleótidos, lo que cambia la conformación y, por tanto, la actividad de la enzima. [8] Un residuo de ácido glutámico adicional rota para formar un enlace de hidrógeno a la citosina no por otras bases, aumentando aún más la especificidad. [9]
Función
Miembro de la familia de exoribonucleasas DEDD más grande, la ARNasa T desempeña un papel clave en la maduración del ARNt [10] , así como en la maduración de los dominios de ARNr 5S [11] y 23S [12] . Específicamente, la ARNasa T escinde el residuo 3 ' AMP de las secuencias 3' CCA al final del ARNt, lo que explica la especificidad de la secuencia de la ARNasa T para detenerse en la secuencia 3 'CC. [13] Además, la ARNasa T puede desempeñar un papel en la reparación del ADN al escindir el extremo 3 'del ADN abultado. [3]
Si bien E. coli puede sobrevivir sin ARNasa T, su ausencia conduce a ciclos de vida más lentos y una respuesta debilitada al hambre. [14] Además, la presencia de RNAsa T en E. coli está relacionada con una mayor resistencia al daño de los rayos UV . [15] Se ha teorizado que, mientras que otras ribonculeasas pueden realizar la función ARNasa T, el hecho de que la ARNasa T sea más eficaz para escindir el ADN y el ARN cerca de las regiones bicatenarias significa que las alternativas son menos efectivas. [16] A pesar de la aparente utilidad de la ARNasa T, la enzima solo se encuentra en gammaproteobacterias . [17]
En E. coli, la ARNasa T está codificada por el gen rnt y se supone que divergió de las subunidades de corrección de pruebas de la polimerasa III durante la aparición de gammaproteobacterias. [16] [17]
Referencias
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