Un radioinmunoensayo ( RIA ) es un inmunoensayo que utiliza moléculas marcadas radiactivamente en una formación escalonada de inmunocomplejos . Un RIA es una técnica de ensayo in vitro muy sensible que se utiliza para medir concentraciones de sustancias, por lo general midiendo concentraciones de antígenos (por ejemplo, niveles de hormonas en sangre ) mediante el uso de anticuerpos .
Radioinmunoensayo | |
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Malla | D011863 |
Aunque la técnica RIA es extremadamente sensible y extremadamente específica , y requiere equipo especializado, sigue siendo uno de los métodos menos costosos para realizar tales mediciones. Requiere precauciones especiales y licencias, ya que se utilizan sustancias radiactivas.
Por el contrario, un ensayo inmunorradiométrico (IRMA) es un inmunoensayo que utiliza moléculas marcadas radiactivamente, pero de forma inmediata en lugar de paso a paso.
Una prueba de radioalergosorbente (RAST) es un ejemplo de radioinmunoensayo. Se utiliza para detectar el alérgeno causante de una alergia .
Método
Clásicamente, para realizar un radioinmunoensayo, una cantidad conocida de un antígeno se vuelve radioactivo , frecuentemente marcándolo con isótopos gamma-radioactivos de yodo , como el 125-I , unido a la tirosina . Este antígeno radiomarcado luego se mezcla con una cantidad conocida de anticuerpo para ese antígeno y, como resultado, los dos se unen específicamente entre sí. Luego, se agrega una muestra de suero de un paciente que contiene una cantidad desconocida de ese mismo antígeno. Esto hace que el antígeno no marcado (o "frío") del suero compita con el antígeno radiomarcado ("caliente") por los sitios de unión del anticuerpo. A medida que aumenta la concentración de antígeno "frío", más se une al anticuerpo, desplazando la variante radiomarcada y reduciendo la proporción de antígeno radiomarcado unido al anticuerpo con respecto al antígeno libre radiomarcado. A continuación, se separan los antígenos unidos y se mide la radiactividad del antígeno libre (no unido) que queda en el sobrenadante usando un contador gamma . [ cita requerida ]
Este método se puede utilizar para cualquier molécula biológica en principio y no se limita a los antígenos del suero, ni se requiere utilizar el método indirecto de medir el antígeno libre en lugar de medir directamente el antígeno capturado. Por ejemplo, si no es deseable o no es posible radiomarcar el antígeno o la molécula diana de interés, se puede realizar un RIA si dos anticuerpos diferentes que reconocen la diana están disponibles y la diana es lo suficientemente grande (por ejemplo, una proteína) para presentar múltiples epítopos de los anticuerpos. Un anticuerpo se marcaría radiactivamente como antes, mientras que el otro permanecería sin modificar. El RIA comenzaría dejando que el anticuerpo no marcado "frío" interactúe y se una a la molécula diana en solución. Preferiblemente, este anticuerpo no marcado se inmoviliza de alguna manera, tal como acoplado a una perla de agarosa , recubierto a una superficie, etc. A continuación, se permite que el anticuerpo radiomarcado "caliente" interactúe con el primer complejo anticuerpo-molécula diana. Después de un lavado extenso, se mide la cantidad directa de anticuerpo radiactivo unido y se cuantifica la cantidad de molécula diana comparándola con una cantidad de referencia ensayada al mismo tiempo. Este método es similar en principio al método ELISA tipo sándwich no radiactivo . [ cita requerida ]
Historia
Este método fue desarrollado por Solomon Berson y Rosalyn Sussman Yalow en el Veterans Administration Hospital en el Bronx , Nueva York. [1] [2] Este desarrollo revolucionario le valió a la Dra. Yalow el Premio Nobel de Medicina en 1977, la segunda mujer en ganarlo. [3] En su discurso de aceptación, la Dra. Yalow dijo: "El mundo no puede permitirse la pérdida del talento de la mitad de su gente si queremos resolver los muchos problemas que nos acosan". [4] Yalow compartió el Premio Nobel con Roger Guillemin y Andrew Schally, quienes ganaron el premio por su investigación sobre "la producción de hormonas peptídicas del cerebro". [3]
Referencias
- ^ Berson, Solomon A., et al. "Metabolismo de la insulina I 131 en sujetos humanos: demostración de la globulina fijadora de insulina en la circulación de sujetos tratados con insulina". Revista de investigación clínica 35.2 (1956): 170-190.
- ^ Berson, Solomon A. y Rosalyn S. Yalow. "Aspectos cuantitativos de la reacción entre la insulina y el anticuerpo que se une a la insulina". Revista de investigación clínica 38.11 (1959): 1996-2016.
- ^ a b "El Premio Nobel de Fisiología o Medicina 1977" . NobelPrize.org . Consultado el 13 de octubre de 2020 .
- ^ Vare, Ethlie Ann; Ptacek, Greg (2002). Patentemente femenino: del AZT a las cenas televisivas: historias de mujeres inventoras y sus innovadoras ideas . Nueva York: Wiley. pag. 99 . ISBN 0471023345.
pasos en la técnica de radioinmunoensayo
enlaces externos
- Radioinmunoensayo en los encabezados de temas médicos (MeSH) de la Biblioteca Nacional de Medicina de EE. UU .
- Radioinmunoensayo (RIA)