Un radioinmunoensayo ( RIA ) es un inmunoensayo que utiliza moléculas radiomarcadas en una formación gradual de inmunocomplejos . Un RIA es una técnica de ensayo in vitro muy sensible que se utiliza para medir concentraciones de sustancias, generalmente midiendo concentraciones de antígenos (por ejemplo, niveles de hormonas en la sangre ) mediante el uso de anticuerpos .
Aunque la técnica RIA es extremadamente sensible y específica , y requiere equipo especializado, sigue siendo uno de los métodos menos costosos para realizar tales mediciones. Requiere precauciones especiales y licencias, ya que se utilizan sustancias radiactivas.
Por el contrario, un ensayo inmunorradiométrico (IRMA) es un inmunoensayo que utiliza moléculas radiomarcadas, pero de forma inmediata en lugar de paso a paso.
Una prueba de radioalergoabsorción (RAST) es un ejemplo de radioinmunoensayo. Se utiliza para detectar el alérgeno causante de una alergia .
Clásicamente, para realizar un radioinmunoensayo, una cantidad conocida de un antígeno se vuelve radiactiva , frecuentemente marcándola con isótopos radiactivos gamma de yodo , como 125-I , unidos a tirosina . Este antígeno radiomarcado luego se mezcla con una cantidad conocida de anticuerpo para ese antígeno y, como resultado, los dos se unen específicamente entre sí. Luego, se agrega una muestra de suero de un paciente que contiene una cantidad desconocida de ese mismo antígeno. Esto hace que el antígeno no marcado (o "frío") del suero compita con el antígeno radiomarcado ("caliente") por los sitios de unión del anticuerpo. como la concentracionde antígeno "frío" aumenta, más de él se une al anticuerpo, desplazando la variante radiomarcada y reduciendo la proporción de antígeno radiomarcado unido al anticuerpo a antígeno radiomarcado libre. A continuación, los antígenos unidos se separan y la radiactividad del antígeno libre (no unido) que queda en el sobrenadante se mide con un contador gamma . [1]
Este método se puede utilizar para cualquier molécula biológica en principio y no se limita a los antígenos séricos, ni se requiere utilizar el método indirecto de medir el antígeno libre en lugar de medir directamente el antígeno capturado. Por ejemplo, si no es deseable o no es posible radiomarcar el antígeno o la molécula diana de interés, se puede realizar un RIA si hay disponibles dos anticuerpos diferentes que reconozcan la diana y la diana es lo suficientemente grande (p. ej., una proteína) para presentar múltiples epitoposa los anticuerpos. Un anticuerpo se marcaría radiactivamente como se indicó anteriormente, mientras que el otro permanecería sin modificar. El RIA comenzaría con el anticuerpo no marcado "frío" que podría interactuar y unirse a la molécula diana en solución. Preferiblemente, este anticuerpo no marcado se inmoviliza de alguna manera, como acoplado a una perla de agarosa , recubriendo una superficie, etc. A continuación, se permite que el anticuerpo radiomarcado "caliente" interactúe con el primer complejo anticuerpo-molécula diana. Después de un lavado extenso, se mide la cantidad directa de anticuerpo radiactivo unido y se cuantifica la cantidad de molécula diana comparándola con una cantidad de referencia analizada al mismo tiempo. Este método es similar en principio al método ELISA tipo sándwich no radiactivo . [2]