El tampón TE es una solución tampón comúnmente utilizada en biología molecular , especialmente en procedimientos que involucran ADN , ADNc o ARN . "TE" se deriva de sus componentes: Tris , un tampón de pH común, y EDTA , una molécula que quela cationes como el Mg 2+ . El propósito del tampón TE es solubilizar el ADN o ARN, mientras lo protege de la degradación.
Receta
Una receta típica para hacer tampón 1X TE es:
El búfer TE también se denomina búfer T 10 E 1 y se lee como "T ten E un búfer". Para preparar una solución de 100 ml de tampón T 10 E 1 , se mezclan 1 ml de base Tris 1 M (pH 10-11) y 0,2 ml de EDTA (0,5 M) y se completan con agua bidestilada hasta 100 ml. Agregue cantidades de microlitros de HCl de alta molaridad para bajar el pH a 8.
Según estudios de nucleasas de la década de 1980, el pH generalmente se ajusta a 7.5 para el ARN y 8.0 para el ADN . [ cita requerida ] Se supone que las respectivas nucleasas de ADN y ARN son menos activas a estos valores de pH, pero el pH 8.0 puede usarse de manera segura para el almacenamiento de ADN y ARN [ cita requerida ] .
El EDTA inactiva aún más la DNasa , uniéndose a los cationes metálicos requeridos por esta enzima. [1]
El ADN genómico y plasmídico se puede almacenar en tampón TE a 4 ° C (39,2 ° F) para uso a corto plazo, o de -20 ° C (-4 ° F) a -80 ° C (-112 ° F) durante largo tiempo. almacenamiento temporal. Deben evitarse los ciclos repetidos de congelación-descongelación. [2]
TE bajo o TE bajo EDTA
El funcionamiento del tampón TE se basa en la quelación de cationes metálicos como el Mg 2+ . El problema es que la polimerasa de PCR también requiere Mg 2+ para funcionar, por lo que si la cantidad de EDTA es demasiado alta, puede afectar la PCR. Existe una versión de tampón TE con 10 veces menos cantidad de EDTA que se usa con mucha frecuencia para los kits de STR forenses. Debido al uso de kits con amplificación multiplex, es necesario tener una menor cantidad de EDTA en la muestra para no interferir con el Mg 2+ presente en la reacción. Si se usa tampón TE regular para diluir la muestra, se observará un desequilibrio en el perfil de ADN, mientras que el TE bajo tendrá un mejor equilibrio. El tampón Low TE o el tampón TE Low EDTA se compone de Tris-HCl 10 mM (pH 8,0) + EDTA 0,1 mM.
Ver también
- Tampón LB , tampón de borato de litio, un tampón similar que contiene iones de litio en lugar de Tris
- El tampón TAE y el tampón TBE se utilizan a menudo en procedimientos que involucran ácidos nucleicos, siendo el más común la electroforesis.
Referencias
tampón TE ph7.4 = Tris 100mM / L (pH7.4) + EDTA 10mM / L (pH8.0) de Molecular Cloning: A Laboratory Manual
- ^ Yagi N, Satonaka K, Horio M, Shimogaki H, Tokuda Y, Maeda S (1996). "El papel de la ADNasa y el EDTA en la degradación del ADN en tejidos fijados con formaldehído". Biotecnología e histoquímica . 71 (3): 123-129. doi : 10.3109 / 10520299609117148 . PMID 8724437 .
- ^ Ross; Haites, Kelly (1990). "Congelación y descongelación repetidas de sangre periférica y ADN en suspensión: efectos sobre el rendimiento y la integridad del ADN" . Revista de Genética Médica . 27 (9): 569–570. doi : 10.1136 / jmg.27.9.569 . PMC 1017219 . PMID 2231649 .
enlaces externos
- "OpenWetWare: búfer TE" . Consultado el 2 de julio de 2006 .