Un diferencial de glóbulos blancos es una prueba de laboratorio médico que proporciona información sobre los tipos y cantidades de glóbulos blancos en la sangre de una persona. La prueba, que generalmente se solicita como parte de un hemograma completo (CBC), mide las cantidades de los cinco tipos normales de glóbulos blancos ( neutrófilos , linfocitos , monocitos , eosinófilos y basófilos ), así como los tipos de células anormales si están presentes. . Estos resultados se informan como porcentajes y valores absolutos y se comparan con los rangos de referencia.para determinar si los valores son normales, bajos o altos. Los cambios en la cantidad de glóbulos blancos pueden ayudar en el diagnóstico de muchas afecciones de salud, incluidas infecciones virales , bacterianas y parasitarias y trastornos sanguíneos como la leucemia .
Diferencial de glóbulos blancos | |
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Sinónimos | Recuento diferencial de leucocitos, [1] leucograma, [2] diferenciación automática, [3] diferencia manual [1] |
Propósito | Describir poblaciones de glóbulos blancos en sangre periférica. |
MedlinePlus | 003657 |
eMedicina | 2085133 |
LOINC | 33255-1 , 24318-8 , 69738-3 |
Los diferenciales de glóbulos blancos se pueden realizar mediante un analizador automático , una máquina diseñada para realizar pruebas de laboratorio, o manualmente, examinando frotis de sangre con un microscopio. La prueba se realizó manualmente hasta que se introdujeron los analizadores diferenciales de glóbulos blancos en la década de 1970, lo que hizo posible el diferencial automático . En el diferencial automático, se carga una muestra de sangre en un analizador, que toma muestras de un pequeño volumen de sangre y mide varias propiedades de los glóbulos blancos para producir un recuento diferencial. El diferencial manual , en el que se cuentan los glóbulos blancos en un portaobjetos de microscopio teñido , ahora se realiza para investigar los resultados anormales del diferencial automático, o cuando lo solicite el proveedor de atención médica. El diferencial manual puede identificar tipos de células que no se cuentan por métodos automatizados y detectar cambios clínicamente significativos en la apariencia de los glóbulos blancos.
En 1674, Antonie van Leeuwenhoek publicó las primeras observaciones microscópicas de células sanguíneas. Las mejoras en la tecnología de microscopios a lo largo de los siglos XVIII y XIX permitieron identificar y contar los tres componentes celulares de la sangre. En la década de 1870, Paul Ehrlich inventó una técnica de tinción que podía diferenciar entre cada tipo de glóbulo blanco. Dmitri Leonidovich Romanowsky modificó posteriormente la tinción de Ehrlich para producir una gama más amplia de colores, creando la tinción Romanowsky , que todavía se utiliza para teñir frotis de sangre para diferenciales manuales.
La automatización del diferencial de glóbulos blancos comenzó con la invención del contador Coulter , el primer analizador hematológico automático , a principios de la década de 1950. Esta máquina utilizó medidas de impedancia eléctrica para contar las células y determinar su tamaño, lo que permitió enumerar los glóbulos blancos y rojos. En la década de 1970, se desarrollaron dos técnicas para realizar recuentos diferenciales automatizados: procesamiento de imágenes digitales de portaobjetos de microscopio y técnicas de citometría de flujo que utilizan dispersión de luz y tinción celular. Estos métodos siguen utilizándose en los analizadores de hematología modernos.
Usos médicos
Tipo de célula | Rango de referencia para adultos (× 10 9 / L) | Rango de referencia para adultos (porcentaje) |
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Neutrófilos | 1,7–7,5 | 50–70 |
Linfocitos | 1.0–3.2 | 18–42 |
Monocitos | 0,1-1,3 | 2-11 |
Eosinófilos | 0,0–0,3 | 1-3 |
Basófilos | 0.0-0.2 | 0-2 |
El diferencial de glóbulos blancos es un análisis de sangre común que a menudo se solicita junto con un hemograma completo . La prueba se puede realizar como parte de un examen médico de rutina ; investigar ciertos síntomas, en particular los que sugieran infección o trastornos hematológicos ; [5] [6] o para monitorear condiciones existentes, como trastornos sanguíneos y enfermedades inflamatorias. [7]
Normalmente se encuentran cinco tipos de glóbulos blancos en la sangre: neutrófilos , linfocitos , monocitos , eosinófilos y basófilos . [8] Los cambios marcados en las proporciones de estos tipos de células, medidos por el diferencial automático o manual, pueden indicar diversas condiciones de salud. [9] Además, los tipos de células que normalmente no se encuentran en la sangre, como las células blásticas , pueden identificarse mediante el diferencial manual. Estos tipos de células se pueden encontrar en trastornos sanguíneos y otros estados patológicos. [10] [11] El diferencial manual también puede identificar cambios en la apariencia de los glóbulos blancos, como linfocitos reactivos , [12] o características como granulación tóxica y vacuolación en neutrófilos. [13] Los resultados del diferencial de glóbulos blancos se informan como porcentajes y valores absolutos. Los recuentos absolutos generalmente se informan en unidades de células por microlitro (µL) o 109 células por litro (L). [6] Luego, el resultado se compara con los rangos de referencia , que son definidos por laboratorios individuales y pueden variar debido a las diferentes poblaciones de pacientes y métodos de prueba. [14]
Las pruebas de hemograma completo y diferencial se suelen realizar en sangre venosa o capilar . Las extracciones de sangre capilar se utilizan generalmente para bebés y personas cuyas venas son de difícil acceso. [15] Para evitar la coagulación , la muestra se introduce en un tubo que contiene el compuesto anticoagulante ácido etilendiaminotetraacético (EDTA). [16] Los tubos que contienen citrato de sodio pueden ser para pacientes en los que el EDTA causa aglutinación plaquetaria . [17] La prueba se realiza con sangre completa, es decir, sangre que no ha sido centrifugada . [18]
Tipos
Diferencial manual
En un diferencial manual, un frotis de sangre teñido se examina bajo un microscopio y los glóbulos blancos se cuentan y clasifican según su apariencia. Por lo general, se realiza un diferencial manual cuando el diferencial automático está marcado para revisión o cuando el proveedor de atención médica lo solicita. [1] [9] Si el diferencial manual muestra hallazgos que sugieren ciertas afecciones graves, como leucemia, el frotis de sangre se deriva a un médico (generalmente un hematólogo o patólogo ) para su confirmación. [1]
Procedimiento
Un frotis de sangre se prepara colocando una gota de sangre en un portaobjetos de microscopio y usando un segundo portaobjetos sostenido en ángulo para esparcir la sangre y tirar de él a través del portaobjetos, formando un "borde emplumado" que consiste en una sola capa de células en el final del frotis. [19] Esto se puede hacer a mano o con un fabricante de portaobjetos automático acoplado a un analizador de hematología. El portaobjetos se trata con una tinción de Romanowsky, comúnmente tinción de Wright o Wright-Giemsa, y se examina bajo el microscopio. El frotis se examina en un patrón sistemático, escaneando de lado a lado dentro del borde emplumado y contando las células consecutivamente. El diferencial se realiza típicamente con un aumento de 400x o 500x , pero se puede usar un aumento de 1000x si hay células anormales. [20] Las células se identifican en función de sus características morfológicas , como el tamaño y la estructura de su núcleo y el color y la textura de su citoplasma. Esto permite identificar tipos de células anormales y cambios en la apariencia celular. [8] En la mayoría de los casos, el microscopista cuenta 100 glóbulos blancos, pero se pueden contar 200 para una mejor representación si el recuento de glóbulos blancos es alto. [21] El recuento diferencial manual produce porcentajes de cada tipo de célula, que se pueden multiplicar por el recuento total de glóbulos blancos del analizador para obtener los valores absolutos. [22]
El diferencial manual se puede automatizar parcialmente con un software de microscopía digital, [23] que utiliza inteligencia artificial para clasificar los glóbulos blancos a partir de microfotografías del frotis de sangre. [24] Sin embargo, esta técnica requiere confirmación mediante revisión manual. [25] [26]
Limitaciones
Debido a que se cuentan relativamente pocas células en el diferencial manual, la variabilidad es mayor que en las técnicas automatizadas, especialmente cuando las células están presentes en cantidades bajas. [27] Por ejemplo, en una muestra que contiene un 5 por ciento de monocitos, los resultados diferenciales manuales podrían estar entre el 1 y el 10 por ciento debido a la variación del muestreo . [28] Además, la identificación celular es subjetiva y la precisión depende de las habilidades de la persona que lee la diapositiva. [27] [29] Una preparación deficiente del frotis de sangre puede causar una distribución desigual de los glóbulos blancos, lo que resulta en un recuento inexacto, [30] y una tinción inadecuada puede impedir la identificación de las células. [31] En general, los recuentos diferenciales manuales presentan coeficientes de variación (CV) que oscilan entre el 5 y el 10 por ciento, mientras que los recuentos diferenciales automáticos de neutrófilos y linfocitos normales tienen CV de alrededor del 3 por ciento. [31]
En las leucemias y otras neoplasias hematológicas , el linaje y las características genéticas de los glóbulos blancos tienen implicaciones importantes para el tratamiento y el pronóstico, y la apariencia microscópica de las células a menudo es insuficiente para una clasificación precisa. [32] [14] En estos casos, se pueden utilizar otras técnicas como la inmunofenotipificación por citometría de flujo o tinciones especiales para identificar definitivamente las células. [33]
Diferencial automatizado
La mayoría de los analizadores de hematología proporcionan un diferencial de cinco partes, que enumera neutrófilos, linfocitos, monocitos, eosinófilos y basófilos. Algunos instrumentos también pueden contar granulocitos inmaduros y glóbulos rojos nucleados . [34] Los analizadores de hematología miden varias propiedades de los glóbulos blancos, como la impedancia, los parámetros de dispersión de la luz y las reacciones de tinción. Estos datos se analizan y grafican en un diagrama de dispersión , formando grupos distintos que corresponden a los tipos de glóbulos blancos. [35] El analizador cuenta muchas más células de las que se cuentan en un diferencial manual, lo que mejora la precisión. [27] Si existen características anormales o poblaciones de células que el analizador no puede identificar, el instrumento puede marcar los resultados para la revisión manual del frotis de sangre. [34] [35]
Procedimiento
Las técnicas comunes utilizadas por los analizadores de hematología para identificar células incluyen la dispersión de luz, el recuento de Coulter y las técnicas de tinción citoquímica. Algunos analizadores también utilizan análisis de radiofrecuencia y etiquetado de anticuerpos monoclonales para identificar células. [27] [36] Las técnicas de tinción utilizadas en los analizadores diferenciales incluyen tinción de mieloperoxidasa , [31] una enzima que se encuentra en las células de linaje mieloide , [37] y ácidos nucleicos , que se encuentran en concentraciones más altas en células inmaduras. [38]
Se aspira un pequeño volumen de sangre (tan bajo como 150 microlitros) al analizador, donde se aplican reactivos para lisar los glóbulos rojos y preservar los glóbulos blancos. La muestra se diluye y se pasa a una celda de flujo, que utiliza el enfoque hidrodinámico para aislar celdas individuales para un análisis preciso de sus propiedades. Se miden y analizan varios parámetros celulares, como el tamaño, la complejidad y las reacciones de tinción, para identificar las poblaciones de células. Los basófilos a menudo se cuantifican utilizando un reactivo que lisa el citoplasma de otros glóbulos blancos pero deja intactos a los basófilos. [31] Las muestras que tienen resultados anormales [1] o se sospecha que contienen células anormales son marcadas por el analizador para la revisión manual de frotis de sangre. [35]
Para garantizar que los resultados del analizador automático sean correctos, las muestras de control de calidad se procesan al menos una vez al día. Estas son muestras con resultados conocidos que con mayor frecuencia proporciona el fabricante del instrumento. Los laboratorios comparan sus resultados diferenciales con los valores conocidos para asegurarse de que el instrumento esté funcionando correctamente. También se puede usar una medición de promedio móvil, en la que los resultados promedio de las muestras de pacientes se miden a ciertos intervalos. Suponiendo que las características de la población de pacientes permanezcan aproximadamente iguales a lo largo del tiempo, el promedio debe permanecer constante. Grandes cambios en el valor promedio pueden indicar problemas con el instrumento. [39] [40]
Limitaciones
Cuando hay glóbulos blancos inmaduros o anormales, los resultados diferenciales automatizados pueden ser incorrectos, lo que requiere una revisión manual del frotis de sangre. En general, del 10 al 25 por ciento de las muestras de CBC se marcan para que el analizador las revise manualmente. [41] Aunque la mayoría de las muestras anormales se marcan automáticamente, algunas pueden pasarse por alto; [42] por el contrario, los analizadores pueden generar señales de falso positivo cuando no hay presencia de células anormales. [41] Los laboratorios de hematología compensan estos problemas al exigir una revisión de frotis cuando los resultados diferenciales o de hemograma completo se encuentran fuera de ciertos umbrales numéricos, independientemente de la presencia de indicadores del analizador. [1] La sensibilidad y especificidad de las señales del analizador se pueden determinar comparando las señales del analizador con los resultados diferenciales manuales. [40]
El recuento automático de basófilos es notoriamente poco fiable, [11] [31] a menudo subestima los recuentos en la basofilia y produce resultados falsamente elevados en presencia de células anormales. [43] Por tanto, el diferencial manual se considera el método de referencia para estas celdas. [11] [44]
Los analizadores pueden contar los glóbulos rojos nucleados, las plaquetas gigantes y agrupadas y los glóbulos rojos que contienen hemoglobinas anormales (como la hemoglobina S en la anemia de células falciformes ) como glóbulos blancos, lo que lleva a resultados diferenciales defectuosos. Los recuentos diferenciales automatizados en muestras envejecidas pueden ser incorrectos debido a la degeneración celular. [45]
Tipos de células e interpretación de resultados
- Neutrófilos
- Los neutrófilos son los glóbulos blancos más comunes en la sangre adulta normal. Cuando se tiñen con una tinción de Romanowsky, exhiben un núcleo multilobulado y un citoplasma rosado que contiene pequeños gránulos de color púrpura. [46] [47]
El recuento de neutrófilos es normalmente más alto en recién nacidos y mujeres embarazadas que en otros grupos. [48] Fuera de estas condiciones, el aumento de los recuentos de neutrófilos ( neutrofilia ) se asocia con infecciones bacterianas , inflamación y diversas formas de estrés fisiológico. [49] El recuento de neutrófilos puede volverse extremadamente alto en respuesta a algunas infecciones y estados inflamatorios, lo que se denomina reacción leucemoide porque el recuento alto de glóbulos blancos imita la leucemia. [50] La neutrofilia también puede ocurrir en los trastornos mieloproliferativos . [49] La
neutropenia , que significa un recuento bajo de neutrófilos, puede ocurrir como respuesta al tratamiento farmacológico (especialmente la quimioterapia) [51] o en ciertas infecciones, como la tuberculosis y la sepsis por gramnegativos . La neutropenia también se presenta en muchos trastornos hematológicos, como la leucemia y el síndrome mielodisplásico , y en una variedad de enfermedades autoinmunitarias y congénitas. [52] Un recuento de neutrófilos por debajo del intervalo de referencia puede ser normal en personas de determinadas etnias; esto se denomina neutropenia étnica benigna . [53] [54] Los recuentos de neutrófilos muy bajos se relacionan con la inmunosupresión . [55]
Cuando son estimulados por una infección o inflamación, los neutrófilos pueden desarrollar características anormales en su citoplasma, como granulación tóxica , vacuolación tóxica y cuerpos de Döhle . Estas características, que son causadas por la liberación de citocinas , [56] se conocen colectivamente como cambios tóxicos. [13]
- Linfocito
- Los linfocitos , que son el segundo tipo más común de glóbulos blancos en adultos, son típicamente células pequeñas con un núcleo redondo y oscuro y una tira delgada de citoplasma azul pálido. Algunos linfocitos son más grandes y contienen algunos gránulos azules. [57]
El aumento del recuento de linfocitos ( linfocitosis ) puede deberse a infecciones virales [58] y también puede ocurrir después de la esplenectomía . Los niños tienen recuentos de linfocitos más altos que los adultos. [59] La leucemia linfocítica crónica se presenta con un recuento elevado de linfocitos y una morfología de linfocitos anormal, en la que los linfocitos tienen núcleos extremadamente densos y agrupados [60] y algunas células aparecen manchadas en el frotis de sangre. [61] Se pueden observar
recuentos bajos de linfocitos ( linfopenia ) en infecciones como el VIH / SIDA , la influenza y la hepatitis viral , así como en la desnutrición proteico-energética , [62] enfermedades agudas y reacciones a medicamentos. [59]
En respuesta a las infecciones virales (especialmente la mononucleosis infecciosa ), los linfocitos pueden aumentar mucho de tamaño, desarrollando núcleos de formas inusuales y grandes cantidades de citoplasma azul oscuro. Estas células se denominan linfocitos reactivos o atípicos [63] y, cuando están presentes, se comentan o se cuentan por separado de los linfocitos normales en el diferencial manual. [14]
- Monocitos
- Los monocitos son células grandes con un núcleo curvo o plegado y un citoplasma gris azulado finamente granulado que a menudo contiene vacuolas . Los monocitos son el tercer glóbulo blanco más común después de los neutrófilos y los linfocitos. [64]
Se observa un aumento en el recuento de monocitos ( monocitosis ) en la infección e inflamación crónica. En la leucemia mielomonocítica crónica y las leucemias agudas de origen monocítico se producen recuentos de monocitos extremadamente altos, así como formas inmaduras de monocitos . [65] El recuento de monocitos puede estar disminuido ( monocitopenia ) en personas que reciben quimioterapia, así como en aquellas con anemia aplásica , quemaduras graves y SIDA. [66]
- Eosinófilos
- Los eosinófilos tienen grandes gránulos anaranjados en su citoplasma y núcleos bilobulados. Se encuentran en cantidades bajas en sangre normal. [64]
Los recuentos elevados de eosinófilos ( eosinofilia ) están asociados con reacciones alérgicas , infecciones parasitarias y asma. [67] [68] Los recuentos de eosinófilos pueden disminuir durante el embarazo y en respuesta al estrés fisiológico, la inflamación o el tratamiento con ciertos medicamentos, como esteroides y epinefrina . [68]
- Basófilo
- Los basófilos exhiben gránulos grandes de color púrpura oscuro que a menudo cubren el núcleo de la célula. Son los más raros de los cinco tipos de células normales. [69]
La basofilia y la eosinofilia pueden ocurrir junto con otras anomalías de los glóbulos blancos en la leucemia mieloide crónica y otros trastornos mieloproliferativos. [69] También se puede observar un aumento en el recuento de basófilos en las reacciones de hipersensibilidad y después de la esplenectomía. El recuento de basófilos puede disminuir durante la ovulación , el tratamiento con esteroides y los períodos de estrés fisiológico. [70]
- Neutrófilos en banda
- Los neutrófilos en banda son formas jóvenes de neutrófilos que carecen de segmentación del núcleo . Estas células, que se identifican mediante el recuento manual, se encuentran en cantidades bajas en la sangre normal de un adulto. [71]
Un desplazamiento a la izquierda , que significa un aumento de los neutrófilos en banda o de los granulocitos inmaduros, puede indicar infección, inflamación o trastornos de la médula ósea, aunque también puede ser un hallazgo normal durante el embarazo . [71] [72] Algunos laboratorios no separan las bandas de los neutrófilos maduros en el recuento diferencial porque la clasificación es muy subjetiva y poco fiable. [14]
- Granulocito inmaduro
- Los granulocitos inmaduros son formas inmaduras de neutrófilos y otros granulocitos (eosinófilos y basófilos). Esta clasificación consta de metamielocitos , mielocitos y promielocitos , que pueden enumerarse por separado en el diferencial manual o informarse juntos como granulocitos inmaduros (IG) mediante métodos automatizados. [73] Los granulocitos inmaduros se encuentran normalmente en la médula ósea , pero no en la sangre periférica. [74]
Cuando están presentes en cantidades significativas en la sangre, los granulocitos inmaduros pueden indicar infección e inflamación, [11] así como enfermedad mieloproliferativa , leucemia y otras afecciones que afectan la médula. [74] Los IG también pueden aumentar con el uso de esteroides y el embarazo. [11] La leucemia mieloide crónica a menudo se presenta con una gran cantidad de granulocitos inmaduros en la sangre periférica. [75] promielocitos anormales con múltiples bastones de Auer , llamados marica células , se producen en aguda leucemia promielocítica . [76]
- Celda blástica
- Las células blásticas son células muy inmaduras que normalmente se encuentran en la médula ósea, donde se convierten en células maduras ( hematopoyesis ) antes de ser liberadas a la sangre. Pueden identificarse por su gran tamaño general, citoplasma azul profundo y núcleo grande con cromatina fina y nucléolos prominentes . [10]
Cuando se ven en el frotis de sangre, las células blásticas son un hallazgo anormal y pueden ser indicativas de leucemia aguda u otros trastornos sanguíneos graves. En raras ocasiones, se pueden ver en casos graves de desviación a la izquierda. La presencia de bastones de Auer en el interior de las células blásticas indica que son de origen mieloide , lo que tiene importantes implicaciones para el tratamiento de la leucemia. [10] [77] Otras características morfológicas pueden proporcionar información sobre el linaje de las células blásticas: por ejemplo, los mieloblastos tienden a ser grandes con nucléolos distintos, mientras que los linfoblastos pueden ser más pequeños con un patrón de cromatina más denso. Sin embargo, estas características no son diagnósticas y generalmente se usa citometría de flujo o tinción especial para confirmar el linaje. [78]
- Otras celdas
- Varias otras células anormales pueden estar presentes en la sangre en ciertas condiciones. Por ejemplo, las células de linfoma pueden encontrarse en el diferencial manual en algunos casos de linfoma , [79] y en la leucemia de mastocitos , los mastocitos , que normalmente están confinados al tejido, circulan en la sangre. [80] Existe un fenómeno muy raro llamado carcinocitemia en el que se ven células tumorales en el frotis de sangre periférica. [81]
Historia
Antes de que se introdujeran los contadores de células automatizados, los recuentos de células se realizaban manualmente; Los glóbulos blancos y rojos y las plaquetas se contaron usando microscopios. [82] La primera persona en publicar observaciones microscópicas de células sanguíneas fue Antonie van Leeuwenhoek , [83] quien informó sobre la aparición de glóbulos rojos en una carta de 1674 a las Actas de la Royal Society de Londres ; [84] Jan Swammerdam había descrito los glóbulos rojos algunos años antes, pero no había publicado sus hallazgos en ese momento. A lo largo de los siglos XVIII y XIX, las mejoras en la tecnología de los microscopios, como las lentes acromáticas, permitieron que los glóbulos blancos y las plaquetas se contaran en muestras no teñidas. En la década de 1870, Paul Ehrlich desarrolló una técnica de tinción que podía diferenciar entre los cinco tipos de glóbulos blancos. La tinción de Ehrlich utilizó una combinación de un tinte ácido y básico para teñir los glóbulos blancos y rojos simultáneamente. [85] Dmitri Leonidovich Romanowsky mejoró esta técnica en la década de 1890 mediante el uso de una mezcla de eosina y azul de metileno envejecido , que produjo una amplia gama de tonos que no estaba presente cuando cualquiera de los tintes se usaba solo. Esto se denominó efecto Romanowsky y se convirtió en la base de la tinción Romanowsky , la técnica que todavía se utiliza para teñir frotis de sangre para diferenciales manuales. [86]
En los primeros años del siglo XX, el diferencial de glóbulos blancos se había convertido en una práctica común en los Estados Unidos, pero las dificultades para interpretar los resultados ponen en duda la utilidad de la prueba. [87] En 1906, [88] Charles Langdon Gibson presentó la tabla de Gibson, que comparaba el recuento total de glóbulos blancos con el recuento de neutrófilos para distinguir entre condiciones " piógenas " y "no piógenas" y predecir la gravedad de las infecciones. Casi al mismo tiempo, Josef Arneth propuso un sistema para clasificar los neutrófilos por su número de lóbulos nucleares, denominado "índice de lóbulos" o recuento de Arneth , y estableció un conjunto de rangos de referencia para la lobularidad de los neutrófilos. Más tarde se descubrió que el análisis de Arneth de la segmentación de neutrófilos tenía una importancia clínica limitada, pero la asociación de neutrófilos hipersegmentados con vitamina B12 y deficiencia de folato sigue siendo aceptada. [89] [90] [91] Viktor Schilling
en 1912 propuso una clasificación diferente de neutrófilos, separándolos en " myelozyten , jugendliche , stabkernige y segmentokernige ", es decir, mielocitos, "juveniles" (metamielocitos), neutrófilos en banda. (a veces llamados "puñaladas") y neutrófilos maduros completamente segmentados, y destacó la importancia clínica del desplazamiento neutrofílico a la izquierda junto con el recuento de glóbulos blancos y la presencia de cambios tóxicos. La monografía de Schilling, Das Blutbild und seine klinische Verwertung ( La imagen de la sangre y su significado clínico ), se tradujo al inglés en 1926, y su sistema de clasificación de neutrófilos encontró rápidamente aceptación en los laboratorios estadounidenses. [92] [93]El primer analizador hematológico automático, el contador Coulter , fue inventado a principios de la década de 1950 por Wallace H. Coulter . [94] [95] El analizador trabajó con el principio de Coulter, que establece que cuando las células se suspenden en un fluido que transporta una corriente eléctrica y pasan a través de una abertura, provocan disminuciones de corriente proporcionales a su volumen debido a su baja conductividad eléctrica . El número y la magnitud de estas disminuciones se pueden utilizar para contar las células sanguíneas y calcular su tamaño. El contador Coulter se diseñó inicialmente para contar glóbulos rojos , pero también resultó eficaz para contar glóbulos blancos. [95]
Después de automatizar el recuento básico de células, el diferencial de glóbulos blancos siguió siendo un desafío. La investigación sobre la automatización del recuento diferencial comenzó en la década de 1970 y adoptó dos enfoques principales: procesamiento de imágenes digitales y citometría de flujo. Utilizando tecnología desarrollada en las décadas de 1950 y 1960 para automatizar la lectura de frotis de Papanicolaou , se produjeron varios modelos de analizadores de procesamiento de imágenes. [96] Estos instrumentos escanearían un frotis de sangre teñido para encontrar núcleos celulares, luego tomarían una instantánea de mayor resolución de la célula para analizarla mediante densitometría . [97] Eran costosos, lentos e hicieron poco para reducir la carga de trabajo en el laboratorio porque aún requerían la preparación y tinción de frotis de sangre, por lo que los sistemas basados en citometría de flujo se hicieron más populares, [98] [99] y en 1990, no había analizadores de imágenes digitales disponibles comercialmente en los Estados Unidos ni en Europa occidental. [100] Estas técnicas disfrutaron de un resurgimiento en la década de 2000 con la introducción de plataformas de análisis de imágenes más avanzadas que utilizan redes neuronales artificiales . [25] [101] [102]
Los primeros dispositivos de citometría de flujo dispararon haces de luz a las células en longitudes de onda específicas y midieron la absorbancia, la fluorescencia o la dispersión de luz resultantes, recopilando información sobre las características de las células y permitiendo la cuantificación de contenidos celulares como el ADN . [103] Uno de esos instrumentos, el espectrofotómetro celular rápido, desarrollado por Louis Kamentsky en 1965 para automatizar la citología cervical, podría generar diagramas de dispersión de células sanguíneas utilizando técnicas de tinción citoquímica. Leonard Ornstein, que ayudó a desarrollar el sistema de tinción en el espectrofotómetro de células rápidas, y sus colegas crearon más tarde el primer analizador diferencial de glóbulos blancos con citometría de flujo comercial, el Hemalog D. [104] [105] Introducido en 1974, [106] [107] este analizador utilizó dispersión de luz, absorbancia y tinción celular para identificar los cinco tipos de glóbulos blancos normales además de las "células grandes no identificadas", una clasificación que generalmente consistía en linfocitos atípicos o células blásticas. El Hemalog D podía contar 10,000 celdas en una corrida, una mejora notable con respecto al diferencial manual. [105] [108] Para 1977 se estimó que "al menos 200" analizadores diferenciales automáticos estaban en uso en todo el mundo. [109] En 1981, Technicon combinó el analizador Hemalog D con el analizador Hemalog-8 para producir el Technicon H6000, el primer analizador diferencial y de recuento sanguíneo completo combinado. Este analizador era impopular entre los laboratorios de hematología porque su funcionamiento requería mucha mano de obra, pero a fines de la década de 1980 y principios de la de 1990, otros fabricantes como Sysmex , Abbott , Roche y Beckman Coulter produjeron ampliamente sistemas similares . [110]
Ver también
- Citometría de flujo
- Recuento de células
Referencias
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