coagulasa
La coagulasa es una enzima proteica producida por varios microorganismos que permite la conversión de fibrinógeno en fibrina . En el laboratorio , se utiliza para distinguir entre diferentes tipos de aislamientos de Staphylococcus . Es importante destacar que S. aureus generalmente es coagulasa positivo, lo que significa que una prueba de coagulasa positiva indicaría la presencia de S. aureus o cualquiera de los otros 11 estafilococos coagulasa positivos . [1] En cambio, una prueba de coagulasa negativa mostraría la presencia de organismos coagulasa negativos como S. epidermidis oS. saprophyticus . Sin embargo, ahora se sabe que no todos los S. aureus son coagulasa positivos. [2] [3] Mientras que los estafilococos coagulasa positivos suelen ser patógenos , los estafilococos coagulasa negativosse asocian más a menudo con infecciones oportunistas . [4]
La coagulasa reacciona con la protrombina en la sangre. El complejo resultante se llama estafilotrombina , que permite que la enzima actúe como una proteasa para convertir el fibrinógeno, una proteína plasmática producida por el hígado, en fibrina. Esto resulta en la coagulación de la sangre. La coagulasa está fuertemente unida a la superficie de la bacteria S. aureus y puede cubrir su superficie con fibrina al entrar en contacto con la sangre. El coágulo de fibrina puede proteger a la bacteria de la fagocitosis y aislarla de otras defensas del huésped. [6] Por lo tanto, la capa de fibrina puede hacer que las bacterias sean más virulentas. La coagulasa unida es parte de la familia más grande de proteínas adhesinas MSCRAMM .
La prueba de la coagulasa se ha utilizado tradicionalmente para diferenciar Staphylococcus aureus de los estafilococos coagulasa negativos . S. aureus produce dos formas de coagulasa (es decir, coagulasa unida y coagulasa libre). La coagulasa unida, también conocida como "factor de aglomeración" , se puede detectar realizando una prueba de coagulasa en portaobjetos, y la coagulasa libre se puede detectar mediante una prueba de coagulasa en tubo.
Se realiza una prueba de coagulasa en portaobjetos con un control negativo para descartar la autoaglutinación. Se colocan dos gotas de solución salina en el portaobjetos etiquetado con el número de muestra, Prueba (T) y control (C). Las dos gotas de solución salina se emulsionan con el organismo de prueba utilizando un lazo de alambre, un alambre recto o un palo de madera. Se coloca una gota de plasma (se recomienda plasma de conejo anticoagulada con EDTA ) [7] sobre la gota de solución salina inoculada correspondiente a la prueba, se mezcla bien y se agita suavemente el portaobjetos durante unos 10 segundos.
Si la prueba de coagulasa en portaobjetos es negativa, se debe realizar una prueba en tubo como confirmación. La formación de grumos en ambas gotas es una indicación de autoaglutinación, por lo que se debe realizar una prueba en tubo. La prueba del tubo no se realiza en cada institución, pero la mayor parte del resultado depende de los hemocultivos del laboratorio.
La prueba en tubo utiliza plasma de conejo que ha sido inoculado con una colonia de estafilococos (es decir, cocos grampositivos que son catalasa positivos). A continuación, el tubo se incuba a 37 °C durante 1,5 horas. Si es negativo, la incubación continúa hasta 18 horas.
