La prueba de gotas de sangre seca (DBS) es una forma de biomuestreo en la que las muestras de sangre se secan y secan en papel de filtro. Las muestras secas pueden enviarse fácilmente a un laboratorio analítico y analizarse mediante varios métodos, como la amplificación de ADN o HPLC .
Historia
Ivar Bang describió por primera vez el DBS como un método de muestreo inusual en 1913. [1] El concepto de que la sangre capilar, obtenida al pinchar el talón o el dedo y manchada sobre papel de filtro, podría usarse para detectar enfermedades metabólicas en grandes poblaciones de recién nacidos fue introducido en Escocia por Robert Guthrie en 1963. La detección neonatal de fenilcetonuria se hizo a nivel nacional en 1969-70. Desde entonces, se han recolectado muestras de tarjetas Guthrie de forma rutinaria de bebés en más de 20 países para detectar fenilcetonuria y, más recientemente , hipotiroidismo congénito , trastornos de células falciformes e infección por VIH. Las limitaciones de sensibilidad y especificidad al cribar volúmenes tan pequeños de sangre restringieron el uso de gotas de sangre seca durante muchos años. Sin embargo, avances recientes como la producción de anticuerpos monoclonales , la expresión de proteínas sintéticas y la introducción de la reacción en cadena de la polimerasa han superado muchos de estos problemas. [2]
Este tipo de análisis de sangre está ahora disponible para que los consumidores lo utilicen en el hogar en los EE. UU. Los análisis de sangre disponibles incluyen vitamina D, estrógeno, testosterona, cortisol, TSH y lípidos. Nueva York es el único estado que prohíbe las pruebas de sangre en el hogar.
Procedimiento
Las muestras de gotas de sangre secas se recolectan aplicando unas gotas de sangre, extraídas con lanceta del dedo, talón o dedo del pie, sobre papel de filtro absorbente especialmente fabricado. Se deja que la sangre sature completamente el papel y se seca al aire durante varias horas. [3] Las muestras se almacenan en bolsas de plástico de baja permeabilidad a los gases con desecante agregado para reducir la humedad y se pueden conservar a temperatura ambiente, incluso en climas tropicales.
Una vez en el laboratorio, los técnicos separan un pequeño disco de papel saturado de la hoja utilizando una perforadora manual o automática, dejando caer el disco en una placa de microtitulación de fondo plano. La sangre se eluye en solución salina tamponada con fosfato que contiene Tween 80 al 0,05% y azida sódica al 0,005% , durante la noche a 4ºC. La placa resultante que contiene los eluidos forma el "patrón" a partir del cual se pueden hacer diluciones para pruebas posteriores. [2]
Como alternativa a perforar un disco de papel, las soluciones de automatización recientes extraen la muestra haciendo pasar un eluyente a través del filtro sin perforarlo. [4] [5] La empresa suiza CAMAG desarrolló una automatización que incluye la aplicación de un estándar interno previo a la extracción. [6]
Prueba de sangre seca para detectar la infección por VIH
La tecnología es prometedora para expandir los servicios de diagnóstico a los bebés infectados por el VIH en entornos de escasos recursos debido a la mayor vida útil de las muestras con una menor necesidad de refrigeración y la naturaleza menos invasiva de la prueba en comparación con otros métodos. A diferencia de las pruebas ELISA para anticuerpos contra el VIH en la sangre, que pueden transmitirse a los bebés durante el embarazo independientemente del virus en sí, las pruebas de sangre seca se pueden utilizar para detectar material genético del virus real, evitando así la probabilidad de un resultado falso positivo. . Las pruebas de detección del VIH en gotas de sangre seca no se consideran lo suficientemente sensibles para las pruebas de diagnóstico, pero pueden ser útiles para estimar la prevalencia del VIH a través de la vigilancia. Las muestras de DBS también presentan un riesgo biológico menor para los manipuladores y son más fáciles de transportar o almacenar que las muestras de sangre líquida. [7]
Principio
La razón de la estabilidad del ADN, ARN o proteína podría atribuirse al hecho de que el material biológico se une a la matriz del papel de filtro y el proceso de secado excluye el agua, que es un factor importante necesario para que actúe la proteasa o nucleasa. La unión del material biológico también se une a varios inhibidores que pueden interferir con varios métodos de amplificación de ácidos nucleicos.
Ver también
Referencias
- ^ Zakaria y todos., Rosita (2016). "Ventajas y desafíos del análisis de manchas de sangre seca por espectrometría de masas en todo el proceso de prueba" . EJIFCC . 27 (4): 288–317. PMC 5282914 . PMID 28149263 .
- ^ a b Parker SP, Cubitt WD (septiembre de 1999). "El uso de la muestra de sangre seca en estudios epidemiológicos" . J. Clin. Pathol . 52 (9): 633–9. doi : 10.1136 / jcp.52.9.633 . PMC 501537 . PMID 10655983 .
- ^ "Ficha informativa: sangre seca" . Directrices para el envío de muestras de manchas de sangre seca . Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades: Oficina de Salud y Seguridad: Subdivisión de Bioseguridad. 9 de marzo de 1995.
- ^ Ganz, N; Singrasa, M; Nicolas, L; Gutiérrez, M; Dingemanse, J; Döbelin, W; Glinski, M (15 de febrero de 2012). "Desarrollo y validación de un análisis de sangre seca humana en línea totalmente automatizado de bosentan y sus metabolitos utilizando el sistema Sample Card And Prep DBS". Journal of Chromatography B . 885–886: 50–60. doi : 10.1016 / j.jchromb.2011.12.012 . PMID 22227055 .
- ^ Spark Holland. "Flujo por desorción (FTD)" . Consultado el 11 de noviembre de 2012 .
- ^ "DBS-MS 500" . www.camag.com . Consultado el 18 de enero de 2016 .
- ^ Cassol S, Salas T, Gill MJ y col. (Diciembre de 1992). "Estabilidad de muestras de manchas de sangre secas para la detección del ADN del virus de la inmunodeficiencia humana mediante la reacción en cadena de la polimerasa" . J. Clin. Microbiol . 30 (12): 3039–42. doi : 10.1128 / jcm.30.12.3039-3042.1992 . PMC 270585 . PMID 1452682 .