ELISA
El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas ( ELISA ) ( / ɪ ˈ l aɪ z ə / , / ˌ iː ˈ l aɪ z ə / ) es un ensayo bioquímico analítico de uso común , descrito por primera vez por Eva Engvall y Peter Perlmann en 1971. [1 ] El ensayo utiliza un inmunoensayo enzimático (EIA) de fase sólida para detectar la presencia de un ligando(comúnmente una proteína) en una muestra líquida utilizando anticuerpos dirigidos contra la proteína a medir. ELISA se ha utilizado como herramienta de diagnóstico en medicina, patología vegetal y biotecnología , así como también como control de calidad en diversas industrias.
En la forma más simple de ELISA, los antígenos de la muestra que se va a analizar se adhieren a una superficie. Luego, se aplica un anticuerpo coincidente sobre la superficie para que pueda unirse al antígeno. Este anticuerpo se une a una enzima y luego se eliminan los anticuerpos no unidos. En el paso final, se agrega una sustancia que contiene el sustrato de la enzima . Si hubo unión, la reacción posterior produce una señal detectable, más comúnmente un cambio de color.
Realizar un ELISA involucra al menos un anticuerpo con especificidad para un antígeno particular. La muestra con una cantidad desconocida de antígeno se inmoviliza sobre un soporte sólido (normalmente una placa de microtitulación de poliestireno ) de forma no específica (mediante adsorción en la superficie) o específica (mediante captura por otro anticuerpo específico del mismo antígeno, en un "sándwich"). "ELISA). Después de inmovilizar el antígeno, se agrega el anticuerpo de detección, formando un complejo con el antígeno. El anticuerpo de detección puede estar unido covalentemente a una enzima o puede ser detectado por un anticuerpo secundario que está unido a una enzima mediante bioconjugación . Entre cada paso, la placa normalmente se lava con un suavesolución detergente para eliminar cualquier proteína o anticuerpo que no esté unido específicamente. Después del último paso de lavado, la placa se revela agregando un sustrato enzimático para producir una señal visible , que indica la cantidad de antígeno en la muestra.
Es de destacar que ELISA puede realizar otras formas de ensayos de unión de ligandos en lugar de ensayos estrictamente "inmuno", aunque el nombre lleva el "inmuno" original debido al uso común y la historia de desarrollo de este método. La técnica requiere esencialmente cualquier reactivo de ligadura que pueda inmovilizarse en la fase sólida junto con un reactivo de detección que se una específicamente y use una enzima para generar una señal que pueda cuantificarse adecuadamente. Entre los lavados, solo el ligando y sus contrapartes de unión específica permanecen específicamente unidos o "inmunoabsorbidos" por interacciones antígeno-anticuerpo.a la fase sólida, mientras que los componentes no específicos o no unidos se eliminan por lavado. A diferencia de otros formatos de ensayo de laboratorio húmedo espectrofotométrico en los que el mismo pocillo de reacción (p. ej., una cubeta) se puede reutilizar después del lavado, las placas ELISA tienen los productos de reacción inmunoabsorbidos en la fase sólida, que forma parte de la placa, por lo que no se pueden reutilizar fácilmente. .
Como ensayo de bioquímica analítica y técnica de "laboratorio húmedo", ELISA implica la detección de un analito (es decir, la sustancia específica cuya presencia se analiza cuantitativa o cualitativamente) en una muestra líquida mediante un método que sigue utilizando reactivos líquidos durante el análisis. (es decir, secuencia controlada de reacciones bioquímicas que generarán una señal que se puede cuantificar e interpretar fácilmente como una medida de la cantidad de analito en la muestra) que permanece líquida y permanece dentro de una cámara de reacción o se necesita para mantener los reactivos contenidos. [2] [3]Esto contrasta con las técnicas de "laboratorio seco" que utilizan tiras secas. Incluso si la muestra es líquida (p. ej., una pequeña gota medida), el paso de detección final en el análisis "seco" implica la lectura de una tira seca mediante métodos como la reflectometría y no necesita una cámara de contención de reacción para evitar el derrame o la mezcla entre muestras. . [4]
