FLAG-tag , o FLAG octapeptide , o FLAG epitope , es una etiqueta de proteína polipeptídica que se puede agregar a una proteína usando tecnología de ADN recombinante , que tiene el motivo de secuencia DYKDDDDK (donde D = ácido aspártico , Y = tirosina y K = lisina ) . [1] Es una de las etiquetas más específicas [2] y es un antígeno artificial para el que se han desarrollado anticuerpos monoclonales específicos de alta afinidad y, por lo tanto, puede usarse para la purificación de proteínas mediante cromatografía de afinidad y también para localizar proteínas. dentro de las células vivas. Se ha utilizado para separarProteína recombinante sobreexpresada a partir de proteína de tipo salvaje expresada por el organismo huésped. También se puede utilizar en el aislamiento de complejos de proteínas con múltiples subunidades, porque su procedimiento de purificación suave tiende a no alterar dichos complejos. Se ha utilizado para obtener proteínas de suficiente pureza y calidad para llevar a cabo la determinación de la estructura 3D mediante cristalografía de rayos X.
Una etiqueta FLAG se puede utilizar en muchos ensayos diferentes que requieren el reconocimiento por parte de un anticuerpo . Si no hay un anticuerpo contra una proteína dada, agregar una etiqueta FLAG a una proteína permite que la proteína se estudie con un anticuerpo contra la secuencia FLAG. Algunos ejemplos son los estudios de localización celular por inmunofluorescencia , inmunoprecipitación o detección por electroforesis de proteínas SDS PAGE y transferencia Western.
La secuencia peptídica de la etiqueta FLAG desde el extremo N hasta el extremo C es: DYKDDDDK (1012 Da). Además, se puede usar en tándem, comúnmente el péptido 3xFLAG: DYKDHD-G-DYKDHD-I-DYKDDDDK (con la etiqueta final que codifica un sitio de escisión de enteroquinasa). Puede fusionarse con el extremo C-terminal o el extremo N-terminal de una proteína, o insertarse dentro de una proteína. Algunos anticuerpos disponibles comercialmente (p. ej., M1/4E11) reconocen el epítopo solo cuando está presente en el extremo N-terminal. Sin embargo, otros anticuerpos disponibles (p. ej., M2) no son sensibles a la posición. El residuo de tirosina en la etiqueta FLAG puede estar sulfatado , lo que puede afectar el reconocimiento de anticuerpos del epítopo FLAG. [3] La etiqueta FLAG se puede usar junto con otras etiquetas de afinidad, por ejemplo, una etiqueta de polihistidina (His-tag ), HA-tag o myc-tag .
Munro y Pelham describieron el primer uso del etiquetado de epítopos en 1984. [4] La etiqueta FLAG fue el segundo ejemplo de una etiqueta de epítopo mejorada completamente funcional, publicado en la literatura científica. [1] [5] [6] y fue la única etiqueta epitópica que se patentó. [7] [8]Desde entonces, se ha convertido en la etiqueta de proteína más utilizada en los laboratorios de todo el mundo. A diferencia de otras etiquetas (p. ej., myc, HA), en las que primero se aisló un anticuerpo monoclonal contra una proteína existente, luego se caracterizó el epítopo y se usó como etiqueta, el epítopo FLAG era un diseño artificial idealizado para el que se generaron anticuerpos monoclonales. . La estructura de la etiqueta FLAG se optimizó para la compatibilidad con las proteínas a las que está unida, ya que es más hidrófila que otras etiquetas de epítopos comunes y, por lo tanto, es menos probable que desnaturalice o inactive las proteínas a las que está unida. Además, las etiquetas FLAG N-terminales se pueden eliminar fácilmente de las proteínas una vez que se han aislado, mediante tratamiento con la proteasa específica, enteroquinasa ( enteropeptidasa ).
El tercer informe de etiquetado de epítopos, ( etiqueta HA ), [9] apareció aproximadamente un año después de que se enviara por primera vez el sistema Flag.