Galjanoplastia de réplica
La placa de réplica es una técnica microbiológica en la que una o más placas de Petri secundarias que contienen diferentes medios de crecimiento selectivo sólidos ( basados en agar ) (que carecen de nutrientes o que contienen inhibidores químicos del crecimiento como antibióticos ) se inoculan con las mismas colonias de microorganismos de una placa primaria ( o plato maestro), reproduciendo el patrón espacial original de las colonias. La técnica implica presionar un disco cubierto de terciopelo y luego imprimir placas secundarias con células en colonias extraídas de la placa original por el material. Generalmente, un gran número de colonias (aproximadamente 30-300) se replican en placas debido a la dificultad derayar cada uno individualmente en un plato separado.
El propósito de la reproducción en placa es poder comparar la placa maestra y cualquier placa secundaria, típicamente para seleccionar un fenotipo deseado . Por ejemplo, cuando una colonia que estaba presente en el plato principal (o plato maestro) no aparece en un plato secundario, muestra que la colonia era sensible a una sustancia en ese plato secundario en particular. Los fenotipos detectables comunes incluyen auxotrofia y resistencia a antibióticos .
El revestimiento de réplica es especialmente útil para la " selección negativa ". Sin embargo, es más correcto referirse a "cribado negativo" en lugar de utilizar el término "selección". Por ejemplo, si uno quisiera seleccionar colonias que fueran sensibles a la ampicilina , la placa primaria se podría replicar en una placa secundaria Amp +placa de agar. Las colonias sensibles en la placa secundaria morirían, pero las colonias aún podrían deducirse de la placa primaria ya que las dos tienen los mismos patrones espaciales de las colonias resistentes a ampicilina. A continuación, las colonias sensibles podrían separarse de la placa primaria. Con frecuencia, el último plato no será selectivo. En la figura, se colocará una réplica de una placa no selectiva después de la placa Amp + para confirmar que la ausencia de crecimiento en la placa selectiva se debe a la selección en sí y no a un problema con la transferencia de células. Si se ve crecimiento en la tercera placa (no selectiva) pero no en la segunda, el agente selectivo es responsable de la falta de crecimiento. Si la placa no selectiva no muestra crecimiento, no se puede decir si se transfirieron células viables,y no se pueden sacar conclusiones sobre la presencia o ausencia de crecimiento en medios selectivos. Esto es particularmente útil si hay dudas sobre la edad o la viabilidad de las células en la placa original.
Al aumentar la variedad de placas secundarias con diferentes medios de crecimiento selectivo , es posible cribar rápidamente un gran número de colonias aisladas individuales para tantos fenotipos como placas secundarias haya.
El desarrollo de réplicas de placas requirió dos pasos. El primer paso fue definir el problema: un método para identificar colonias duplicadas. El segundo paso fue idear un medio para implementar de manera confiable el primer paso. El revestimiento de réplicas fue descrito por primera vez por Esther Lederberg y Joshua Lederberg en 1952. [1] Lederberg buscó usar una tela que pudiera esterilizarse y tuviera una pila de tela vertical., similar a un "cepillo de alambre" analógico 2D que se había utilizado clásicamente para transferir colonias. El papel resultó insatisfactorio ya que "su capilaridad lateral y su compresión de las colonias distorsionaron y rompieron el patrón de crecimiento original", y el terciopelo de nailon era demasiado caro y sus fibras más rígidas causaron problemas, lo que llevó a la elección y eventual estandarización del terciopelo de algodón. [2] Aunque se demostró por primera vez con bacterias , el recubrimiento de réplica basado en terciopelo también se ha convertido en una técnica estándar en la microbiología de eucariotas , como la levadura . [3]
