En patología , la tinción con plata es el uso de plata para alterar selectivamente la apariencia de un objetivo en microscopía de secciones histológicas ; en electroforesis en gel de gradiente de temperatura ; y en geles de poliacrilamida .
En tradicional vidrieras , tinción de plata es una técnica para producir amarillo a naranja o tonos marrones (o verde sobre una base de vidrio azul), mediante la adición de una mezcla que contiene compuestos de plata (en particular, nitrato de plata ), y disparando a la ligera. Se introdujo poco después de 1800 y es la "mancha" en el término "vidrieras". Los compuestos de plata [1] se mezclan con sustancias aglutinantes, se aplican a la superficie del vidrio y luego se cuecen en un horno o en un horno. [2] [3]
Historia
Camillo Golgi perfeccionó la tinción con plata para el estudio del sistema nervioso . Aunque se desconoce el mecanismo químico exacto por el cual esto ocurre, [4] el método de Golgi tiñe un número limitado de células al azar en su totalidad. [5]
La tinción con plata fue introducida por Kerenyi y Gallyas como un procedimiento sensible para detectar trazas de proteínas en geles . [6] La técnica se ha extendido al estudio de otras macromoléculas biológicas que se han separado en una variedad de soportes. [7]
La tinción clásica con azul brillante de Coomassie generalmente puede detectar una banda de proteína de 50 ng; La tinción de plata aumenta la sensibilidad típicamente 50 veces.
Muchas variables pueden influir en la intensidad del color y cada proteína tiene sus propias características de tinción; cristalería limpia, reactivos puros y agua de la más alta pureza son los puntos clave para una tinción exitosa. [8]
Química
Algunas células son argentafinas . Estos reducen la solución de plata a plata metálica después de la formalina fijación . Otras células son argirófilas . Estos reducen la solución de plata a plata metálica después de exponerse a la mancha que contiene un reductor , por ejemplo, hidroquinona o formalina.
El nitrato de plata forma fosfato de plata insoluble con iones fosfato ; este método se conoce como tinción de Von Kossa . Cuando se somete a un agente reductor, generalmente hidroquinona , forma plata elemental negra. Se utiliza para estudiar la formación de partículas de fosfato cálcico durante el crecimiento óseo.
Aplicaciones
Caracterización histológica
La tinción con plata ayuda a visualizar los objetivos de interés, a saber, los componentes celulares intracelulares y extracelulares como el ADN y las proteínas , como el colágeno tipo III y las fibras de reticulina mediante la deposición de partículas de plata metálica sobre los objetivos de interés. [9]
Microbiología diagnóstica
Pseudomonas , [10] Legionella , Leptospira , H. pylori , Bartonella y Treponema , y hongos como Pneumocystis , Cryptococcus y Candida son organismos que se tiñen con plata. [ cita requerida ]
Análisis de cariotipo
La tinción con plata se utiliza en el cariotipo . El nitrato de plata tiñe la proteína asociada a la región de organización nucleolar (NOR), produciendo una región oscura en la que se deposita la plata y denota la actividad de los genes de ARNr dentro de la NOR. Los cromosomas humanos 13, 14, 15, 21 y 22 tienen NOR, que aumentan la actividad de la tinción de plata al menos 50 veces. [ cita requerida ]
Análisis genómico y proteómico
La tinción de plata se utiliza para teñir geles. La tinción de plata de proteínas en geles de agarosa fue desarrollada en 1973 por Kerenyi y Gallyas. [11] Más tarde se adaptó a los geles de poliacrilamida utilizados en SDS-PAGE , [12] [13] [14] [15] [16] y también para teñir ADN o ARN. [17] Las glicosilaciones de glicoproteínas y polisacáridos se pueden oxidar mediante un pretratamiento de 1 hora con ácido peryódico al 0,1% a 4 ° C, lo que mejora la unión de los iones de plata y el resultado de la tinción. [18]
Primero, las proteínas se desnaturalizan en el gel mediante una solución fijadora de ácido acético al 10% y etanol al 30% y se precipitan, al mismo tiempo que se extrae el detergente (principalmente SDS ). Por tanto, la difusión de las proteínas se reduce significativamente. Después de varios lavados con agua, el gel se incuba en una solución de nitrato de plata . Los iones de plata se unen a las cadenas laterales cargadas negativamente de las proteínas. A continuación, se lava con agua el exceso de iones de plata. En el último paso de desarrollo, los iones de plata se reducen a plata elemental mediante la adición de formaldehído alcalino . Esto tiñe los sitios donde están presentes las proteínas, de marrón a negro.
La intensidad de la tinción depende de la estructura primaria de la proteína. Además, la limpieza de los recipientes utilizados y la pureza de los reactivos influyen en la tinción de plata. [19] Los artefactos comunes en los geles teñidos con plata son bandas de queratina en los rangos de 54-57 kDa y 65-68 kDa [20] como contaminación de la muestra antes de la electroforesis.
Tinciones de plata metenamina
Hay varias tinciones de plata que incorporan metenamina , que incluyen:
- Tinción de plata con metenamina de Grocott , ampliamente utilizada como pantalla de organismos fúngicos .
- La tinción de Jones , una plata metenamina -ácido periódico-Schiff que tiñe para la membrana basal , aprovechando para ver el GBM "con púas" asociado con la glomerulonefritis membranosa .
Galería
Una tinción de plata ( GMS ) que demuestra el hongo Histoplasma (bolas redondas negras) en una biopsia de hígado.
Varias muestras de ADN de especímenes de Littorina plena amplificadas mediante PCR con cebadores dirigidos a un locus de repetición de secuencia simple variable (SSR, también conocido como microsatélite). Las muestras se procesaron en un gel de poliacrilamida al 5% y se visualizaron mediante tinción con plata.
Proteínas de membrana de RBC separadas por SDS-PAGE y teñidas con plata. [21]
Referencias
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enlaces externos
- MedEd en Loyola Histo / practico / tintes / hp2-55.html
- [1] Hempelmann E. SDS-Protein PAGE y detección de proteínas mediante tinción de plata e inmunotransferencia de proteínas de Plasmodium falciparum. en: Moll K, Ljungström J, Perlmann H, Scherf A, Wahlgren M (eds) Methods in Malaria Research, 5th edition, 2008, 263-266