La solución de Bouin , o solución de Bouin , es un fijador compuesto utilizado en histología . [1] Fue inventado por el biólogo francés Pol Bouin y está compuesto de ácido pícrico , ácido acético y formaldehído en una solución acuosa. [2] El líquido de Bouin es especialmente útil para la fijación de biopsias del tracto gastrointestinal porque este fijador permite una tinción nuclear mejor y más nítida que la formalina tamponada neutra al 10%. No es un buen fijador cuando se debe preservar la ultraestructura del tejido para microscopía electrónica.. Sin embargo, es un buen fijador cuando se debe preservar una estructura tisular con una textura suave y delicada. El ácido acético en este fijador lisa los glóbulos rojos y disuelve pequeños depósitos de hierro y calcio en los tejidos. Una variante en la que el ácido acético se reemplaza por ácido fórmico se puede utilizar tanto para la fijación de tejido como para la descalcificación. [3] Los efectos de los tres productos químicos en la solución de Bouin se equilibran entre sí. La formalina hace que el citoplasma se vuelva basófilo, pero este efecto se equilibra con el efecto del ácido pícrico. Esto da como resultado una excelente tinción H&E nuclear y citoplásmica . El efecto de endurecimiento de los tejidos de la formalina se equilibra mediante la fijación de los tejidos blandos de los ácidos pícrico y acético. El efecto de hinchamiento del tejido del ácido acético se equilibra con el efecto de encogimiento del tejido del ácido pícrico. [4]
Las secciones hidratadas de tejido fijado con formaldehído generalmente se pretratan con solución de Bouin para obtener resultados correctos en las tinciones tricrómicas para colores contrastantes en fibras colágenas y citoplásmicas (musculares). Los métodos del tricrómico se idearon para tejidos fijados en mezclas ácidas que contienen cloruro de mercurio, que ahora se utilizan sólo en pequeña escala.) Sólo se necesita el componente de ácido pícrico de la solución de Bouin para lograr esta corrección de la tinción tricrómica. [5]
Al usar la solución de Bouin, pueden surgir varios problemas potenciales. Debido a la formalina en la solución, el pigmento de formalina puede estar presente cuando se observan secciones de tejido bajo el microscopio. El tejido húmedo debe fijarse en solución de Bouin durante menos de 24 horas. El exceso de ácido pícrico debe eliminarse del tejido con varias soluciones de alcohol y agua o la calidad de la tinción puede deteriorarse con el tiempo. El tejido húmedo fijado en solución de Bouin debe almacenarse en una solución de alcohol y agua en lugar de una solución de Bouin. Dado que la solución de Bouin contiene formaldehído, ácido pícrico y ácido acético, se deben tomar las precauciones de seguridad adecuadas para estas sustancias y seguir las regulaciones. En particular, observar que el ácido pícrico puede ser explosivo, sensible a la fricción y a los golpes cuando está seco y en contacto con algunos metales puede formar picratos metálicos inestables.
Bajo el nombre de "fluido de Bouin", este fijador también se usa ampliamente para invertebrados marinos. [6] Se prepara de la siguiente manera: ácido pícrico, solución acuosa saturada - 75 ml; formalina, solución acuosa al 40% - 25 ml; ácido acético, glacial - 5 ml. [7]
Variaciones
Solución Gendre
La solución de Gendre es una versión alcohólica de la solución de Bouin. Se usa una solución alcohólica saturada con ácido pícrico en lugar de una solución acuosa saturada con ácido pícrico al preparar esta solución. Esta solución es útil cuando el glucógeno y otros carbohidratos deben conservarse en los tejidos. Se prepara mezclando una solución saturada de ácido pícrico en etanol al 95% (80 ml) con formalina (formaldehído al 37-40%) (15 ml) y ácido acético glacial (5 ml). [8] El fijador de Gendre contiene más ácido pícrico que el de Bouin, debido a su mayor solubilidad (6,23% p / v) en etanol que en agua (1,23% p / v). [9]
Solución de Hollande
La solución de Hollande es una versión de la solución de Bouin que contiene acetato de cobre . El acetato de cobre estabiliza las membranas de los glóbulos rojos y los gránulos de eosinófilos y células endocrinas de modo que hay menos lisis de estos componentes celulares que en la solución de Bouin regular. [10] El fijador de Hollandes se prepara añadiendo 6,25 g de acetato cúprico, 10 g de ácido pícrico (polvo húmedo), 25 ml de formalina (37-40% de formaldehído) y 2,5 ml de ácido acético glacial (100%) a 250 ml de agua. [11]
Referencias
- ^ Carson, Freida L .; Hladik, Christa (2009). Histotecnología: un texto autoinstructivo (3 ed.). Hong Kong: Prensa de la Sociedad Estadounidense de Patología Clínica . pag. 19. ISBN 978-0-89189-581-7.
- ^ Culling, CFA 1974. Manual de técnicas histopatológicas e histoquímicas (incluidas técnicas de museo), 3ª ed. Londres: Butterworths, p. 49.
- ^ Bancroft, John D .; Gamble, Marilyn, eds. (2008). Teoría y práctica de las técnicas de histología (6 ed.). China: Churchill Livingstone Elsevier. pag. 72. ISBN 978-0-443-10279-0.
- ^ Baker, JR 1958. Principios de microtécnica biológica. Londres, Methuen, páginas 149-150.
- ^ Kiernan, JA 2015 Métodos histológicos e histoquímicos. Teoría y práctica. Banbury, Reino Unido: Scion, p. 195.
- ^ Lincoln, Roger J .; Sheals, John Gordon, eds. (1979). Animales invertebrados - Colección y preservación (1 ed.). Reino Unido: Museo Británico (Historia Natural). pag. 128. ISBN 0521 296773.
- ^ Culling, CFA 1974. Manual de técnicas histopatológicas e histoquímicas (incluidas técnicas de museo), 3ª ed. Londres: Butterworths, p. 49.
- ^ Culling, CFA 1974. Manual de técnicas histopatológicas e histoquímicas (incluidas técnicas de museo), 3ª ed. Londres: Butterworths, p. 49.
- ^ Dean, JA 1973. Manual de química de Lange, 11ª ed. Nueva York: McGraw-Hill, p. 7-383.
- ^ Carson, Freida L .; Hladik, Christa (2009). Histotecnología: un texto autoinstructivo (3 ed.). Hong Kong: Prensa de la Sociedad Estadounidense de Patología Clínica . pag. 19. ISBN 978-0-89189-581-7.
- ^ Gray, P. 1954. Formulario y guía del microtomista. Reimpreso en 1975. Huntington, NY: Kreiger, p. 220.