Inmunohistoquímica
La inmunohistoquímica ( IHC ) es la aplicación más común de inmunotinción . Implica el proceso de identificación selectiva de antígenos (proteínas) en las células de una sección de tejido mediante la explotación del principio de que los anticuerpos se unen específicamente a los antígenos en los tejidos biológicos . [1] IHC toma su nombre de las raíces "inmuno", en referencia a los anticuerpos utilizados en el procedimiento, e "histo", que significa tejido (comparar con inmunocitoquímica ). Albert Coons conceptualizó e implementó por primera vez el procedimiento en 1941. [2]
La visualización de una interacción anticuerpo-antígeno se puede lograr de varias formas, principalmente de las siguientes:
La tinción inmunohistoquímica se usa ampliamente en el diagnóstico de células anormales como las que se encuentran en los tumores cancerosos . Los marcadores moleculares específicos son característicos de eventos celulares particulares como la proliferación o la muerte celular ( apoptosis ). [4] La inmunohistoquímica también se usa ampliamente en la investigación básica para comprender la distribución y localización de biomarcadores y proteínas expresadas diferencialmente en diferentes partes de un tejido biológico.
La preparación de la muestra es fundamental para mantener la morfología celular, la arquitectura del tejido y la antigenicidad de los epítopos diana . Esto requiere una recolección, fijación y corte adecuados de tejido . A menudo se usa una solución de formalina para fijar el tejido, pero se pueden usar otros métodos.
El tejido puede luego cortarse en rodajas o usarse entero, dependiendo del propósito del experimento o del tejido en sí. Antes de seccionar, la muestra de tejido se puede incrustar en un medio, como cera de parafina o criomedia. Las secciones se pueden cortar en una variedad de instrumentos, más comúnmente un micrótomo , criostato o vibratomo . Las muestras normalmente se cortan en rodajas en un rango de 3 µm-5 µm . [ cita requerida ] Las rodajas se montan en portaobjetos, se deshidratan con lavados con alcohol de concentraciones crecientes (p. ej., 50%, 75%, 90%, 95%, 100%) y se aclaran con un detergente como el xileno antes de tomar la imagen debajo de un microscopio.
Dependiendo del método de fijación y preservación del tejido, la muestra puede requerir pasos adicionales para que los epítopos estén disponibles para la unión de anticuerpos, incluida la desparafinización y la recuperación de antígenos. En el caso de tejidos incluidos en parafina y fijados con formalina, la recuperación de antígenos a menudo es necesaria e implica el tratamiento previo de las secciones con calor o proteasa . [1] [5] Estos pasos pueden marcar la diferencia entre la tinción de los antígenos diana o la no tinción.
