Una prueba de micronúcleos es una prueba que se utiliza en la detección toxicológica de compuestos genotóxicos potenciales . El ensayo es ahora reconocido como uno de los ensayos más exitosos y confiables para carcinógenos genotóxicos , es decir, carcinógenos que actúan causando daño genético y está recomendado por las directrices de la OCDE para la prueba de sustancias químicas. [1] Hay dos versiones principales de esta prueba, una in vivo y la otra in vitro .
La prueba in vivo normalmente utiliza médula ósea de ratón o sangre periférica de ratón. Cuando un eritroblasto de la médula ósea se convierte en un eritrocito policromático , se extruye el núcleo principal; cualquier micronúcleo que se haya formado puede permanecer en el citoplasma, de otro modo anucleado . La visualización de los micronúcleos se facilita en estas células porque carecen de un núcleo principal . Un aumento en la frecuencia de eritrocitos policromáticos micronucleados en animales tratados es una indicación de daño cromosómico inducido . [2]
Los micronúcleos se utilizaron por primera vez para cuantificar el daño cromosómico por HJ Evans et al., En las puntas de las raíces de la habichuela , Vicia faba . Posteriormente, el ensayo in vivo fue desarrollado de forma independiente por W. Schmid y por JA Heddle y sus colegas. El ensayo de sangre periférica de ratón fue desarrollado por JT MacGregor y ahora ha sido adaptado para la medición por citometría de flujo por A. Tometsko y sus colegas. El primer uso de micronúcleos en células cultivadas fue realizado por JA Heddle y sus colegas en linfocitos humanos . El ensayo ha sido mejorado por M. Fenech y sus colegas para su uso en linfocitos y otras células en células de cultivo .
La tinción de Giemsa simple se utilizó originalmente para la puntuación de MN. Más tarde, se estableció el método de micronúcleo de bloqueo de citocinesis (CBMN) , en el que se utilizó Cyt-B , un inhibidor del ensamblaje del huso, para prevenir la citocinesis que se produce después de la división nuclear. El método CBMN se utiliza para la evaluación de la pérdida cromosómica, rotura y apoptosis y necrosis asociadas inducidas por diferentes mutágenos . [3]
Un micronúcleo es el núcleo errático (tercer) que se forma durante la anafase de la mitosis o meiosis . Los micronúcleos (el nombre significa 'núcleo pequeño') son cuerpos citoplasmáticos que tienen una porción de cromosoma acéntrico o cromosoma completo que no fue transportado a los polos opuestos durante la anafase. Su formación da como resultado que la célula hija carece de una parte o la totalidad de un cromosoma. Estos fragmentos de cromosomas o cromosomas completos normalmente desarrollan membranas nucleares y se forman como micronúcleos como un tercer núcleo. Después de la citocinesis, una célula hija termina con un núcleo y la otra con un núcleo grande y uno pequeño, es decir, micronúcleos. Existe la posibilidad de que se forme más de un micronúcleo cuando ha ocurrido más daño genético. La prueba de micronúcleos se utiliza como herramienta para la evaluación de la genotoxicidad de varios productos químicos. Es más fácil de realizar que la prueba de aberración cromosómica en términos de procedimientos y evaluación. Utilizando la hibridación in situ fluorescente (FISH) con sondas dirigidas a la región del centrómero , se puede determinar si se pierde un cromosoma completo o solo un fragmento.
Ver también
Referencias y notas
- ^ http://www.oecd.org/document/35/0,3746,en_2649_34377_45773411_1_1_1_1,00.html .
- ^ http://www.oecd.org/dataoecd/18/34/1948442.pdf .
- ↑ Luzhna, Lidia; Kathiria, Palak; Kovalchuk, Olga (1 de enero de 2013). "Micronúcleos en la evaluación de la genotoxicidad: de la genética a la epigenética y más allá" . Fronteras en genética . 4 : 131. doi : 10.3389 / fgene.2013.00131 . PMC 3708156 . PMID 23874352 .