El para- nitrofenilfosfato ( pNPP ) es un sustrato cromogénico no proteicopara fosfatasas alcalinas y ácidas que se utiliza en ELISA y ensayos espectrofotométricos convencionales. [1] fosfatasas catalizan la hidrólisis de pNPP liberar fosfato inorgánico y la base conjugada del párrafo nitrofenol (PNP). El fenolato resultante es amarillo, con una absorción máxima a 405 nm. [2] Esta propiedad se puede utilizar para determinar la actividad de varias fosfatasas, incluida la fosfatasa alcalina (AP) y la proteína tirosina fosfatasa (PTP). También podemos medir la concentración de enzima usando la propiedad de absorbancia.La espectrofotometría [3] es una técnica en la que medimos la cantidad de luz absorbida por la muestra, y a partir de esta absorbancia usando la ley de Beer-Lambert [4] podemos calcular la concentración de nuestra enzima usando la siguiente ecuación.
Nombres | |||
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Nombre IUPAC preferido 4-nitrofenil dihidrógeno fosfato | |||
Otros nombres pNPP | |||
Identificadores | |||
Modelo 3D ( JSmol ) | |||
CHEBI | |||
CHEMBL | |||
ChemSpider | |||
Tarjeta de información ECHA | 100.005.777 | ||
PubChem CID | |||
Tablero CompTox ( EPA ) | |||
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Propiedades | |||
C 6 H 6 NO 6 P | |||
Masa molar | 219.09 | ||
Compuestos relacionados | |||
Compuestos relacionados | Paraoxon | ||
Salvo que se indique lo contrario, los datos se proporcionan para materiales en su estado estándar (a 25 ° C [77 ° F], 100 kPa). | |||
verificar ( ¿qué es ?) | |||
Referencias de Infobox | |||
A = ɛlc [5]
A es la absorbancia de la muestra, ɛ es el coeficiente de absortividad, l es la longitud de la luz recorrida en cm y c es la concentración. De esta ecuación podemos ver que la concentración y la absorbancia están directamente relacionadas. en otras palabras, la absorbancia será mayor para la muestra con mayor concentración de proteína (enzima).
La sustancia es sensible a la luz y, por lo tanto, debe almacenarse protegida de la luz. Esto también es importante después de agregar el sustrato a la mezcla y antes de leer. −20 ° C es la temperatura de almacenamiento óptima. [6]
Referencias
- ↑ Lorenz, Ulrike (7 de mayo de 2017). "Ensayos de proteína tirosina fosfatasa" . Protocolos actuales en inmunología . 91 (1): 11.7.1–12. doi : 10.1002 / 0471142735.im1107s93 . ISBN 978-0471142737. PMC 3097125 . PMID 21462163 .
- ^ MacKintosh, C. (1993). En DG Hardie (Ed.). Fosforilación de proteínas: un enfoque práctico . 221. Nueva York: IRL Press.
- ^ Matsushima, Ayako; Inoue, Yorinao; Shibata, Kazuo (1975). "Espectrofotometría de absorción de derivados de proteínas nativas" . Bioquímica analítica . 65 (1–2): 362–368. doi : 10.1016 / 0003-2697 (75) 90520-5 . ISSN 0003-2697 . PMID 1169006 .
- ^ Mayerhöfer, Thomas G .; Mutschke, Harald; Popp, Jürgen (5 de abril de 2016). "Empleando teorías mucho más allá de sus límites, el caso de la ley (Boguer-) Beer-Lambert" . ChemPhysChem . 17 (13): 1948-1955. doi : 10.1002 / cphc.201600114 . ISSN 1439-4235 . PMID 26990241 .
- ^ Markwell, John (septiembre de 2009). "Enfoques fundamentales de laboratorio para bioquímica y biotecnología, 2ª edición" . Educación en Bioquímica y Biología Molecular . 37 (5): 317–318. doi : 10.1002 / bmb.20321 . ISSN 1470-8175 .
- ^ Biolabs, Nueva Inglaterra. "Fosfato de p-nitrofenilo (PNPP) - NEB" . www.NEB.com . Consultado el 29 de octubre de 2017 .
enlaces externos
- pNPP sal disódica hexahidratada (SigmaAldrich.com)
- Productos de la marca Nunc