Una prueba puntual en liquenología es un análisis puntual que se utiliza para ayudar a identificar los líquenes . Se realiza colocando una gota de un producto químico en diferentes partes del liquen y observando el cambio de color (o la ausencia del mismo) asociado con la aplicación del producto químico. Las pruebas se encuentran de forma rutinaria en claves dicotómicas para especies de líquenes y aprovechan la amplia gama de metabolitos secundarios producidos por los líquenes y su singularidad entre los taxones . Como tal, las pruebas puntuales revelan la presencia o ausencia de sustancias químicas en varias partes de un liquen. Fueron propuestos por primera vez por el botánico William Nylander en 1866. [1]
Tres pruebas puntuales comunes utilizan una solución acuosa de KOH al 10 % (prueba K), una solución acuosa saturada de polvo blanqueador o hipoclorito de calcio (prueba C) o una solución alcohólica de p-fenilendiamina al 5 % (prueba P). Los cambios de color ocurren debido a la presencia de metabolitos secundarios particulares en el liquen.
El reactivo para la prueba K es una solución acuosa de hidróxido de potasio (KOH) (10–25 %) o, en ausencia de KOH, una solución acuosa de hidróxido de sodio (NaOH, lejía) al 10 %, que proporciona resultados casi idénticos. . [4] Una solución de KOH al 10 % conservará su eficacia durante aproximadamente 6 meses a un año. [5] La prueba depende de la formación de sal y requiere la presencia de al menos un grupo funcional ácido en la molécula. Los compuestos de líquenes que contienen una quinona como parte de su estructura producirán un color rojo oscuro a violeta. Los compuestos de ejemplo incluyen los pigmentos que son antraquinonas , naftoquinonas yterfenilquinonas . Se producen colores de amarillo a rojo con la prueba K y algunos depsidos (incluidos la atranorina y el ácido tamnólico ) y muchas depsidonas de β- orcinol . Por el contrario, las xantonas , los derivados del ácido pulvínico y el ácido úsnico no tienen ninguna reacción. [4]
Esta prueba utiliza una solución saturada de hipoclorito de calcio (polvo blanqueador) o, alternativamente, una solución diluida (normalmente se usa un 5,25 %) de hipoclorito de sodio o lejía doméstica sin diluir . Estas soluciones generalmente se reemplazan diariamente ya que se descomponen dentro de las 24 a 48 horas; se descomponen aún más rápidamente cuando se exponen a la luz solar (menos de una hora), por lo que se recomienda conservarlos en un frasco de color oscuro. Otros factores que aceleran la descomposición de estas soluciones son el calor, la humedad y el dióxido de carbono . [6]
Los colores típicamente observados con la prueba C son rojo y rosa anaranjado. Los productos químicos que causan una reacción roja incluyen el ácido anziaico , la eritrina y el ácido lecanórico , mientras que los que dan como resultado un color rojo anaranjado incluyen el ácido girofórico. En raras ocasiones, se produce un color verde esmeralda, causado por la estrepsilina química . [7]
Esto también se conoce como la prueba de PD. Utiliza una solución etanólica al 1-5% de parafenilendiamina (PD), que se prepara colocando una gota de etanol (70-95%) sobre unos pocos cristales de la sustancia química; esto produce una solución inestable y sensible a la luz que dura alrededor de un día. [8] Una forma alternativa de esta solución, llamada solución de Steiner, es mucho más duradera aunque produce reacciones de color menos intensas. Por lo general, se prepara disolviendo 1 gramo de PD, 10 gramos de sulfito de sodio y 0,5 mililitros de detergente en 100 mililitros de agua; inicialmente de color rosa, la solución se vuelve púrpura con el tiempo. La solución de Steiner durará meses. [5] La fenilendiamina reacciona conaldehídos para producir bases de Schiff que son de color amarillo a rojo. La mayoría de las depsidonas de β-orcinol y algunas depsidonas de β-orcinol reaccionarán positivamente. [8] El PD es venenoso tanto en forma de polvo como de solución, y las superficies que entran en contacto con él (incluida la piel) se decolorarán. [9]