1-Fluoro-2,4-dinitrobenceno
El 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno (comúnmente llamado reactivo de Sanger , dinitrofluorobenceno , DNFB o FDNB ) es una sustancia química que reacciona con el aminoácido N-terminal de los polipéptidos . Esto puede ser útil para secuenciar proteínas .
En 1936, Gottlieb presentó una síntesis en la que el 1-cloro-2,4-dinitrobenceno reaccionaba con fluoruro de potasio (KF) en nitrobenceno : [3]
En 1945, Frederick Sanger describió su uso para determinar el aminoácido N-terminal en las cadenas polipeptídicas, en particular la insulina . [4] Los resultados iniciales de Sanger sugirieron que la insulina era una molécula más pequeña de lo estimado previamente (peso molecular 12 000) y que constaba de cuatro cadenas (dos que terminaban en glicina y dos que terminaban en fenilalanina ), con las cadenas entrecruzadas por enlaces disulfuro . . Sanger continuó trabajando en la insulina, usando dinitrofluorobenceno en combinación con otras técnicas, finalmente dio como resultado la secuencia completa de insulina (que consta de solo dos cadenas, con un peso molecular de 6000). [5]
Tras el informe inicial de Sanger sobre el reactivo, el método del dinitrofluorobenceno se adoptó ampliamente para el estudio de proteínas, hasta que fue reemplazado por otros reactivos para el análisis terminal (p. ej., cloruro de dansilo y posteriormente aminopeptidasas y carboxipeptidasas ) y otros métodos generales para la determinación de secuencias (p. ej., Edman degradación ). [5]
El dinitrofluorobenceno reacciona con el grupo amino de los aminoácidos para producir dinitrofenil -aminoácidos. Estos aminoácidos DNP son moderadamente estables en condiciones de hidrólisis ácida que rompen los enlaces peptídicos . Los aminoácidos DNP se pueden recuperar y la identidad de esos aminoácidos se puede descubrir mediante cromatografía . Más recientemente, el reactivo de Sanger también se ha utilizado para el análisis bastante difícil de distinguir entre las formas reducida y oxidada de glutatión y cisteína en sistemas biológicos junto con HPLC. Este método es lo suficientemente robusto como para que se pueda realizar en matrices tan complejas como la sangre o el lisado celular. [6] [7]
