| Barnase | ||||||
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 El complejo estrechamente unido entre barnasa y su inhibidor barstar . Barnase está coloreada por una estructura secundaria y barstar está coloreada en azul. [1] | ||||||
| Identificadores | ||||||
| Símbolo | Barnase | |||||
| PDB | 1BRS Más estructuras | |||||
| UniProt | P00648 | |||||
| Otros datos | ||||||
| Número CE | 3.1.27.- | |||||
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Barnasa (un acrónimo de "bacteriana" "ribonucleasa") es un bacteriana proteína que consta de 110 aminoácidos y tiene ribonucleasa actividad. Es sintetizado y secretado por la bacteria Bacillus amyloliquefaciens , pero es letal para la célula cuando se expresa sin su inhibidor barstar . El inhibidor se une y ocluye el sitio activo de la ribonucleasa, evitando que la barnasa dañe el ARN de la célula después de que se sintetice pero antes de que se haya secretado. El complejo barnasa / barstar se caracteriza por su unión proteína-proteína extraordinariamente estrecha , con una tasa de 10 8s −1 M −1 .
Estudios de plegamiento de proteínas
Barnasa no tiene enlaces disulfuro , ni requiere cationes divalentes o componentes no peptídicos para plegarse. Esta simplicidad, en combinación con su transición de plegamiento reversible, significa que la barnasa se ha estudiado ampliamente para comprender cómo se pliegan las proteínas. [2] [3] [4] El plegamiento de barnasa ha sido ampliamente estudiado en el laboratorio de Alan Fersht , quien lo utilizó como caso de prueba en el desarrollo de un método para caracterizar los estados de transición de plegamiento de proteínas conocido como análisis de valor phi .
Sitio activo y mecanismo catalítico
Barnasa cataliza la hidrólisis en los sitios de diribonucleótido GpN. La escisión se produce en dos pasos utilizando un mecanismo ácido-base general : se forma un intermedio cíclico durante el primer paso de transesterificación , que luego se hidroliza para liberar el ARN escindido . Los dos residuos más importantes involucrados en la catálisis son Glu73 y His102, ambos esenciales para la actividad enzimática. Glu73 es la base general, mientras que His102 es el ácido general. Aunque no está directamente involucrado en la catálisis ácido-base, Lys27 también es fundamental para la actividad; se ha implicado en la unión del sustrato en estado de transición. [5]
Ver también
Referencias
- ^ PDB : 1BRS ; Buckle AM, Schreiber G, Fersht AR (agosto de 1994). "Reconocimiento de proteína-proteína: análisis estructural cristalino de un complejo barnasa-barstar a una resolución de 2.0-A". Bioquímica . 33 (30): 8878–89. doi : 10.1021 / bi00196a004 . PMID 8043575 .
- ^ Serrano L, Kellis JT, Cann P, Matouschek A, Fersht AR (abril de 1992). "El plegamiento de una enzima. II. Subestructura de barnasa y la contribución de diferentes interacciones a la estabilidad de la proteína". J. Mol. Biol . 224 (3): 783–804. doi : 10.1016 / 0022-2836 (92) 90562-X . PMID 1569557 .
- ^ Serrano L, Matouschek A, Fersht AR (abril de 1992). "El plegamiento de una enzima. III. Estructura del estado de transición para el despliegue de barnasa analizada por un procedimiento de ingeniería de proteínas". J. Mol. Biol . 224 (3): 805-18. doi : 10.1016 / 0022-2836 (92) 90563-Y . PMID 1569558 .
- ^ Matouschek A, Serrano L, Fersht AR (abril de 1992). "El plegamiento de una enzima. IV. Estructura de un intermedio en el replegamiento de barnasa analizada mediante un procedimiento de ingeniería de proteínas". J. Mol. Biol . 224 (3): 819–35. doi : 10.1016 / 0022-2836 (92) 90564-Z . PMID 1569559 .
- ^ Mossakowska DE, Nyberg K, Fersht AR (mayo de 1989). "Caracterización cinética de la ribonucleasa recombinante de Bacillus amyloliquefaciens (barnasa) e investigación de residuos clave en catálisis por mutagénesis dirigida". Bioquímica . 28 (9): 3843–50. doi : 10.1021 / bi00435a033 . PMID 2665810 .
Lectura adicional
Enlaces externos
- Entrada InterPro
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- ^ Kippen, AD; Arcus, VL; Fersht, AR (1994). "Estudios estructurales sobre péptidos correspondientes a mutantes de la hélice alfa principal de barnasa". Bioquímica . 33 (33): 10013–10021. doi : 10.1021 / bi00199a027 . PMID 8060969 .
- ^ Arcus, VL; Vuilleumier, S .; Freund, SM; Bycroft, M .; Fersht, AR (1994). "Hacia la resolución de la ruta de plegamiento de barnasa: las asignaciones de RMN 13C, 15N y 1H de la columna vertebral completa de su estado de pH desnaturalizado" . Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 91 (20): 9412–9416. doi : 10.1073 / pnas.91.20.9412 . PMC 44822 . PMID 7937780 .
- ^ Arcus, V .; Vuilleumier, S .; Freund, SM; Bycroft, M .; Fersht, AR (1995). "Una comparación de los estados desnaturalizados de pH, urea y temperatura de Barnasa por RMN heteronuclear: implicaciones para la iniciación del plegamiento de proteínas". Revista de Biología Molecular . 254 (2): 305–321. doi : 10.1006 / jmbi.1995.0618 . PMID 7490750 .
- ^ Oliveberg, M .; Arcus, VL; Fersht, AR (1995). "Valores de PKA de los grupos carboxilo en los estados nativos y desnaturalizados de barnasa: Los valores de pKA del estado desnaturalizado son, en promedio, 0,4 unidades más bajos que los de los compuestos modelo". Bioquímica . 34 (29): 9424–9433. doi : 10.1021 / bi00029a018 . PMID 7626612 .
