El ensayo del ácido bicinconínico ( ensayo BCA ), también conocido como ensayo Smith , en honor a su inventor, Paul K. Smith de Pierce Chemical Company , [1] ahora parte de Thermo Fisher Scientific, es un ensayo bioquímico para determinar la concentración total de proteína en una solución (0,5 μg / ml a 1,5 mg / ml), similar al ensayo de proteínas de Lowry , ensayo de proteínas de Bradford o reactivo de biuret . La concentración de proteína total se muestra mediante un cambio de color de la solución de muestra de verde a púrpura en proporción a la concentración de proteína, que luego se puede medir usando colorimétrico técnicas.
Mecanismo
Una solución madre de BCA contiene los siguientes ingredientes en un altamente alcalina solución con un pH 11.25: ácido bicinconínico , carbonato de sodio , bicarbonato de sodio , tartrato de sodio y cobre (II) sulfato pentahidrato.
El ensayo de BCA se basa principalmente en dos reacciones. Primero, los enlaces peptídicos en la proteína reducen los iones Cu 2+ del sulfato de cobre (II) a Cu + (una reacción dependiente de la temperatura). La cantidad de Cu 2+ reducida es proporcional a la cantidad de proteína presente en la solución. A continuación, dos moléculas de ácido bicinconínico quelatan con cada ión Cu + , formando un complejo de color púrpura que absorbe intensamente la luz a una longitud de onda de 562 nm .
El complejo de ácido bicinconínico Cu + está influenciado en muestras de proteínas por la presencia de cadenas laterales de cisteína / cistina, tirosina y triptófano. A temperaturas más altas (37 a 60 ° C), los enlaces peptídicos ayudan en la formación del complejo de reacción. Se recomienda incubar el ensayo de BCA a temperaturas más altas como una forma de aumentar la sensibilidad del ensayo al tiempo que se minimizan las variaciones causadas por la composición desigual de aminoácidos. [2]
La cantidad de proteína presente en una solución se puede cuantificar midiendo los espectros de absorción y comparándolo con soluciones de proteína de concentración conocida.
Ver también
Referencias
- ^ Smith, PK; et al. (1985). "Medición de proteínas mediante ácido bicinconínico". Anal. Biochem . 150 (1): 76–85. doi : 10.1016 / 0003-2697 (85) 90442-7 . PMID 3843705 .
- ^ Olsen BJ, Markwell J (2007). "Ensayos para la determinación de la concentración de proteínas" (PDF) . Protocolos actuales en la ciencia de las proteínas : 14-17.
- Wiechelman, K .; Braun, R. y Fitzpatrick, J. (1988). "Investigación del ensayo de proteína de ácido bicinconínico: Identificación de los grupos responsables de la formación del color". Anal. Biochem . 175 (1): 231–7. doi : 10.1016 / 0003-2697 (88) 90383-1 . PMID 3245570 .
- Stoscheck, CM. (1990). "Cuantificación de proteínas". Métodos en enzimología . 182 : 50–69. doi : 10.1016 / 0076-6879 (90) 82008-P . ISBN 9780121820831. PMID 2314256 .
enlaces externos
- OpenWetWare
- Química del ensayo BCA