El ensayo de proteínas de Lowry es un ensayo bioquímico para determinar el nivel total de proteína en una solución . La concentración de proteína total se muestra mediante un cambio de color de la solución de muestra en proporción a la concentración de proteína, que luego se puede medir utilizando técnicas colorimétricas . Lleva el nombre del bioquímico Oliver H. Lowry, que desarrolló el reactivo en la década de 1940. Su artículo de 1951 que describe la técnica es el artículo más citado en la literatura científica, citado más de 300.000 veces. [1] [2] [3]
Mecanismo
El método combina las reacciones de los iones de cobre con los enlaces peptídicos en condiciones alcalinas ( prueba de Biuret ) con la oxidación de residuos de proteínas aromáticas . El método de Lowry se basa en la reacción de Cu + , producido por la oxidación de enlaces peptídicos, con el reactivo de Folin-Ciocalteu (una mezcla de ácido fosfotúngstico y ácido fosfomolíbdico en la reacción de Folin-Ciocalteu). El mecanismo de reacción no se comprende bien, pero implica la reducción del reactivo de Folin-Ciocalteu y la oxidación de residuos aromáticos (principalmente triptófano , también tirosina ). Los experimentos han demostrado que la cisteína también es reactiva al reactivo. Por lo tanto, los residuos de cisteína en la proteína probablemente también contribuyan a la absorbancia observada en el ensayo de Lowry. [4] El resultado de esta reacción es una molécula de color azul intenso conocida como azul de heteropolimolibdeno. [5] La concentración del reactivo de Folin reducido (azul de heteropolimolibdeno) se mide mediante absorbancia a 660 nm. [6] Como resultado, la concentración total de proteína en la muestra se puede deducir de la concentración de residuos de triptófano y tirosina que reducen el reactivo de Folin-Ciocalteu.
El método fue propuesto por primera vez por Lowry en 1951. El ensayo de ácido bicinconínico y el ensayo de Hartree-Lowry son modificaciones posteriores del procedimiento de Lowry original.
Ver también
Referencias
- ^ Van Noorden, R .; Maher, B .; Nuzzo, R. (2014). "Los 100 mejores periódicos" . Naturaleza . 514 (7524): 550–553. Código Bib : 2014Natur.514..550V . doi : 10.1038 / 514550a . PMID 25355343 .
- ^ Kresge, N .; Simoni, RD; Hill, RL (2005). "El artículo más citado en la historia editorial: determinación de proteínas por Oliver H. Lowry" . Revista de Química Biológica . 280 (28): e25.
- ^ Garfield, E. (1990). "Los artículos más citados de todos los tiempos, SCI 1945-1988. Parte 1A. Los 100 principales de SCI : ¿se borrará alguna vez el método Lowry?" (PDF) . Contenidos actuales . 7 : 3-14.
- ^ Everette, JD; Bryant, QM; Verde, AM; Abbey, YA; Wangila, GW; Walker, RB (28 de julio de 2010). "Estudio exhaustivo de la reactividad de diversas clases de compuestos hacia el reactivo de Folin-Ciocalteu" . Revista de Química Agrícola y Alimentaria . 58 (14): 8139–8144. doi : 10.1021 / jf1005935 . PMC 4075968 . PMID 20583841 .
- ^ Ninfa, Alexander J. (2010). Enfoques fundamentales de laboratorio para bioquímica y biotecnología . Estados Unidos de América: John Wiley & Sons, INC. P. 112. ISBN 978-0-470-08766-4.
- ^ Lowry, OH; Rosebrough, Nueva Jersey; Farr, AL; Randall, RJ (1951). "Medición de proteínas con el reactivo de fenol de Folin" (PDF) . Revista de Química Biológica . 193 (1): 265–75. doi : 10.1016 / S0021-9258 (19) 52451-6 . PMID 14907713 .
- Walker, JM (2002). El manual de protocolos de proteínas. Totowa, Nueva Jersey: Humana Press.
enlaces externos
- Una simplificación del método de ensayo de proteínas de Lowry et al. que es de aplicación más general
Estimación de proteínas mediante el método Lowry en Acube Lifesciences