La citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) es una función efectora de los anticuerpos IgG e IgM . Cuando se unen al antígeno de superficie en la célula diana (p. Ej., Célula infectada bacteriana o viral), la ruta clásica del complemento se activa al unir la proteína C1q a estos anticuerpos, lo que da como resultado la formación de un complejo de ataque de membrana (MAC) y la lisis de la célula diana.
El sistema del complemento es activado eficazmente por los anticuerpos IgG1, IgG3 e IgM humanos, débilmente por los anticuerpos IgG2 y no es activado por los anticuerpos IgG4. [1]
Es un mecanismo de acción mediante el cual los anticuerpos terapéuticos [2] o los fragmentos de anticuerpos [3] pueden lograr un efecto antitumoral. [4] [5]
Uso de ensayos de CDC
Anticuerpos terapéuticos
El desarrollo de anticuerpos terapéuticos antitumorales implica el análisis in vitro de sus funciones efectoras, incluida la capacidad de activar CDC para matar las células diana. El enfoque clásico consiste en incubar anticuerpos con células diana y fuente de complemento ( suero ). Luego, la muerte celular se determina con varios enfoques:
- Método radiactivo : las células diana se marcan con 51 Cr antes del ensayo de CDC, se libera cromo durante la lisis celular yse mide lacantidad de radiactividad . [6] [7]
- Medición de la actividad metabólica de las células vivas (células vivas la tinción): después de la incubación de las células diana con anticuerpos y complemento, plasma membrana permeables colorante se añade (por ejemplo calceína -AM [7] [8] o resazurina [6] [9] ). Las células vivas lo metabolizan en unproducto fluorescente impermeableque puede detectarse mediante citometría de flujo . Este producto no se puede formar en células muertas metabólicamente inactivas.
- Medición de la actividad de las enzimas intracelulares liberadas : las células muertas liberan enzimas (por ejemplo, LDH o GAPDH ) [6] y la adición de su sustrato conduce a un cambio de color, que normalmente se cuantifica como cambio de absorbancia o luminiscencia .
- Tinción de células muertas : un tinte (fluorescente) penetra en las células muertas a través de su membrana plasmática dañada. Por ejemplo, el yoduro de propidio se une al ADN de las células muertas y la señal fluorescente se mide mediante citometría de flujo. [6]
Prueba de tipificación y compatibilidad cruzada de HLA
Los ensayos de CDC se utilizan para encontrar un donante adecuado para el trasplante de órganos o de médula ósea , a saber, un donante con un fenotipo coincidente del sistema de histocompatibilidad HLA . [10] Al principio, la tipificación de HLA se realiza para que el paciente y el donante determinen sus fenotipos de HLA. Cuando se encuentra una pareja potencialmente adecuada, se realiza una prueba de compatibilidad cruzada para excluir que el paciente produzca anticuerpos anti-HLA específicos del donante, lo que podría causar el rechazo del injerto .
La forma CDC de tipificación de HLA (otras palabras, tipificación serológica) utiliza lotes de anticuerpos anti-HLA de antisueros alogénicos o anticuerpos monoclonales caracterizados . Estos anticuerpos se incuban uno a uno con linfocitos del paciente o del donante y fuente de complemento. La cantidad de células muertas (y por tanto el resultado positivo) se mide mediante tinción de células muertas o vivas. Hoy en día, la tipificación de CDC está siendo reemplazada por tipificación molecular, que puede identificar secuencias de nucleótidos de moléculas de HLA mediante PCR . [10]
El ensayo CDC se usa generalmente para realizar pruebas de compatibilidad cruzada. La versión básica implica la incubación del suero del paciente con linfocitos del donante y una segunda incubación después de agregar el complemento de conejo. La presencia de células muertas (prueba positiva) significa que el donante no es adecuado para este paciente en particular. Hay modificaciones disponibles para aumentar la sensibilidad de la prueba, incluida la extensión del tiempo de incubación mínimo, la adición de globulina antihumana (AHG), la eliminación de los anticuerpos no unidos antes de agregar el complemento, la separación del subconjunto de células T y células B. Además de la compatibilidad cruzada de CDC, existe una compatibilidad cruzada de citometría de flujo disponible, que es más sensible y puede detectar incluso anticuerpos complementarios no activadores. [11]
Ver también
- Contraste con la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC)
Referencias
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- ^ El papel del complemento en el mecanismo de acción de rituximab para el linfoma de células B: implicaciones para la terapia. Zhou 2008
- ^ La actividad de citotoxicidad dependiente del complemento de los fragmentos de anticuerpos terapéuticos se adquiere por acoplamiento de glucanos inmunogénicos. Archivado el 9 de abril de 2016 en la Wayback Machine.
- ^ Meyer, Saskia; Leusen, Jeanette HW; Boross, Peter (2014). "Regulación del complemento y modulación de su actividad en la terapia con anticuerpos monoclonales del cáncer" . mAbs . 6 (5): 1133-1144. doi : 10.4161 / mabs.29670 . ISSN 1942-0862 . PMC 4622586 . PMID 25517299 .
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