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Diagnóstico de laboratorio de infecciones virales.
Propósitoprueba de infección viral

En el laboratorio de diagnóstico, las infecciones virales pueden confirmarse mediante una multitud de métodos. La virología diagnóstica ha cambiado rápidamente debido al advenimiento de las técnicas moleculares y al aumento de la sensibilidad clínica de los ensayos serológicos. [1]

Muestreo [ editar ]

Se puede utilizar una amplia variedad de muestras para pruebas virológicas. El tipo de muestra que se envía al laboratorio a menudo depende del tipo de infección viral que se diagnostica y de la prueba requerida. Una técnica de muestreo adecuada es esencial para evitar posibles errores preanalíticos. Por ejemplo, se deben recolectar diferentes tipos de muestras en tubos apropiados para mantener la integridad de la muestra y almacenar a temperaturas apropiadas (generalmente 4 ° C) para preservar el virus y prevenir el crecimiento de bacterias o hongos. A veces, también se pueden muestrear varios sitios.

Los tipos de muestras incluyen:

Aislamiento de virus [ editar ]

Ver también: cultura viral

Los virus a menudo se aíslan de la muestra inicial del paciente. Esto permite que la muestra de virus crezca en cantidades más grandes y permite ejecutar un mayor número de pruebas en ellas. Esto es particularmente importante para las muestras que contienen virus nuevos o raros para los que aún no se han desarrollado pruebas de diagnóstico.

Muchos virus se pueden cultivar en cultivo celular en el laboratorio. Para hacer esto, la muestra de virus se mezcla con células, un proceso llamado adsorción , después del cual las células se infectan y producen más copias del virus. [3] Aunque diferentes virus a menudo solo crecen en ciertos tipos de células, hay células que apoyan el crecimiento de una gran variedad de virus y son un buen punto de partida, por ejemplo, la línea celular de riñón de mono africano ( células Vero ), fibroblastos de pulmón humano ( MRC-5 ) y células de carcinoma epidermoide humano ( HEp-2 ). Un medio de determinar si las células están replicando con éxito el virus es comprobar si hay un cambio en la morfología celular o la presencia demuerte celular usando un microscopio.

Otros virus pueden requerir métodos alternativos de crecimiento, como la inoculación de huevos de gallina embrionados (p. Ej., Virus de la influenza aviar [4] ) o la inoculación intracraneal de virus utilizando ratones recién nacidos (p. Ej., Lyssavirus [5] ).

Métodos basados ​​en ácidos nucleicos [ editar ]

Las técnicas moleculares son las pruebas diagnósticas más específicas y sensibles. [6] Son capaces de detectar todo el genoma viral o partes del genoma viral. En el pasado, las pruebas de ácido nucleico se han utilizado principalmente como prueba secundaria para confirmar resultados serológicos positivos. [3] Sin embargo, a medida que se vuelven más baratos y más automatizados, se están convirtiendo cada vez más en la herramienta principal para el diagnóstico. [3]

Reacción en cadena de la polimerasa [ editar ]

La detección de genomas de ADN y ARN víricos se puede realizar mediante la reacción en cadena de la polimerasa . Esta técnica hace muchas copias del genoma del virus utilizando sondas específicas de virus. Las variaciones de la PCR, como la PCR con transcriptasa inversa anidada y la PCR en tiempo real , también se pueden utilizar para determinar las cargas virales en el suero del paciente. Esto se usa a menudo para monitorear el éxito del tratamiento en casos de VIH .

Secuenciación [ editar ]

Artículo principal: secuenciación del genoma completo

La secuenciación es el único método de diagnóstico que proporcionará la secuencia completa del genoma de un virus. Por lo tanto, proporciona la mayor cantidad de información sobre diferencias muy pequeñas entre dos virus que se verían iguales usando otras pruebas de diagnóstico. Actualmente solo se usa cuando se requiere esta profundidad de información. Por ejemplo, la secuenciación es útil cuando se prueban mutaciones específicas en el paciente para determinar la terapia antiviral y la susceptibilidad a la infección. Sin embargo, a medida que las pruebas se vuelven más baratas, más rápidas y más automatizadas, es probable que la secuenciación se convierta en la principal herramienta de diagnóstico en el futuro.

Métodos basados ​​en microscopía [ editar ]

Inmunofluorescencia o inmunoperoxidasa [ editar ]

Los ensayos de inmunofluorescencia o inmunoperoxidasa se utilizan comúnmente para detectar si un virus está presente en una muestra de tejido. Estas pruebas se basan en el principio de que si el tejido está infectado con un virus, un anticuerpo específico de ese virus podrá unirse a él. Para ello, se mezclan con la muestra de tejido anticuerpos que son específicos para diferentes tipos de virus. Después de que el tejido se expone a una longitud de onda de luz específica o una sustancia química que permite visualizar el anticuerpo.

Estas pruebas requieren anticuerpos especializados que se producen y compran a empresas comerciales. Estos anticuerpos comerciales suelen estar bien caracterizados y se sabe que se unen a un solo tipo específico de virus. También se conjugan con un tipo especial de etiqueta que permite visualizar el anticuerpo en el laboratorio, es decir, emitirá fluorescencia o un color. Por tanto, la inmunofluorescencia se refiere a la detección de un anticuerpo fluorescente (inmuno) y la inmunoperoxidasa se refiere a la detección de un anticuerpo coloreado (la peroxidasa produce un color marrón oscuro).

Ensayo de inmunofluorescenciaEnsayo de inmunoperoxidasa

Microscopía electrónica [ editar ]

Artículo principal: microscopía electrónica de diagnóstico

La microscopía electrónica es un método que puede tomar una fotografía de un virus completo y puede revelar su forma y estructura. Por lo general, no se usa como una prueba de diagnóstico de rutina, ya que requiere un tipo altamente especializado de preparación de muestras, microscopio y experiencia técnica. Sin embargo, la microscopía electrónica es muy versátil debido a su capacidad para analizar cualquier tipo de muestra e identificar cualquier tipo de virus. Por lo tanto, sigue siendo el estándar de oro para identificar virus que no aparecen en las pruebas de diagnóstico de rutina o para los que las pruebas de rutina presentan resultados contradictorios. [7]

Microscopía electrónica del sapovirus

Detección de anticuerpos del huésped [ editar ]

Una persona que ha sido infectada recientemente por un virus producirá anticuerpos en su torrente sanguíneo que reconocen específicamente ese virus. A esto se le llama inmunidad humoral . Son importantes dos tipos de anticuerpos. El primero llamado IgM es muy eficaz para neutralizar virus, pero solo lo producen las células del sistema inmunológico durante unas pocas semanas. El segundo, llamado IgG , se produce de forma indefinida. Por lo tanto, la presencia de IgM en la sangre del huésped se utiliza para detectar una infección aguda, mientras que la IgG indica una infección en el pasado. [8] Ambos tipos de anticuerpos se miden cuando se realizan pruebas de inmunidad . [9]

Las pruebas de anticuerpos están ampliamente disponibles. Se puede hacer para virus individuales (por ejemplo, usando un ensayo ELISA) pero los paneles automatizados que pueden detectar muchos virus a la vez son cada vez más comunes.

Ensayo de hemaglutinación [ editar ]

Artículo principal: ensayo de hemaglutinación

Algunos virus se adhieren a moléculas presentes en la superficie de los glóbulos rojos, por ejemplo, el virus de la influenza. [10] Una consecuencia de esto es que, a ciertas concentraciones, una suspensión viral puede unir ( aglutinar ) los glóbulos rojos evitando que se asienten en suspensión.

Ver también [ editar ]

  • Serología
  • Diagnóstico molecular

Referencias [ editar ]

  1. ^ Leland, DS; Ginocchio, CC (2007). "Papel del cultivo celular para la detección de virus en la era de la tecnología" . Revisiones de microbiología clínica . 20 (1): 49–78. doi : 10.1128 / CMR.00002-06 . PMC  1797634 . PMID  17223623 .
  2. ^ Gwaltney JM, Hayden FG (febrero de 1992). "Estrés psicológico y resfriado común". N Engl J Med . 326 (9): 644–5, respuesta del autor 645–6. doi : 10.1056 / NEJM199202273260915 . PMID 1310349 . 
  3. ^ a b c "Métodos de diagnóstico en virología, métodos virológicos, cultivo de virus, aislamiento de virus" . virology-online.com . Consultado el 3 de enero de 2018 .
  4. ^ Brauer, Rena; Chen, Peter (2015). "Propagación del virus de la influenza en huevos de gallina embrionados" . Revista de experimentos visualizados (97). doi : 10.3791 / 52421 . PMC 4401370 . PMID 25867050 .  
  5. ^ Kuzmin, Ivan V. (2015). "Aislamiento de virus en animales". Técnicas de laboratorio actuales en el diagnóstico, la investigación y la prevención de la rabia, volumen 2 . págs. 13-23. doi : 10.1016 / B978-0-12-801919-1.00002-6 . ISBN 9780128019191.
  6. ^ Dhamad, AE; Abdal Rhida, MA (2020). "COVID-19: métodos de detección molecular y serológica" . PeerJ . 8 : e10180. doi : 10.7717 / peerj.10180 . PMID 33083156 . 
  7. ^ Hazelton, Paul R .; Gelderblom, Hans R. (2003). "Microscopía electrónica para el diagnóstico rápido de agentes infecciosos emergentes1" . Enfermedades infecciosas emergentes . 9 (3): 294-303. doi : 10.3201 / eid0903.020327 . PMC 2958539 . PMID 12643823 .  
  8. ^ Greer, Shaun; Alexander, Graeme JM (1995). "4 Serología y detección viral". Gastroenterología clínica de Baillière . 9 (4): 689–721. doi : 10.1016 / 0950-3528 (95) 90057-8 . PMID 8903801 . 
  9. ^ Laurence, Jeffrey C. (2005). "Vacunas contra la hepatitis ay B de individuos infectados con el virus de la inmunodeficiencia humana". La Revista Estadounidense de Medicina . 118 (10): 75–83. doi : 10.1016 / j.amjmed.2005.07.024 . PMID 16271546 . 
  10. ^ "Ensayo de inhibición de la hemaglutinación de la influenza" . www.virology.ws . Consultado el 19 de octubre de 2020 .