El caldo de lisogenia ( LB ) es un medio rico en nutrientes que se utiliza principalmente para el crecimiento de bacterias . Su creador, Giuseppe Bertani , pretendía que LB significara caldo de lisogenia , [1] pero LB también ha llegado a significar coloquialmente caldo Luria , caldo Lennox o medio Luria-Bertani . La fórmula del medio LB se publicó en 1951 en el primer artículo de Bertani sobre lisogenia . En este artículo describió el experimento modificado de una sola ráfaga.y el aislamiento de los fagos P1 , P2 y P3 . Había desarrollado el medio LB para optimizar el crecimiento de Shigella y la formación de placa . [1] [2]
Las formulaciones de medios LB han sido un estándar industrial para el cultivo de Escherichia coli desde la década de 1950. [3] [4] [5] [6] [7] Estos medios se han utilizado ampliamente en aplicaciones de microbiología molecular para la preparación de ADN plasmídico y proteínas recombinantes . Sigue siendo uno de los medios más utilizados para mantener y cultivar cepas recombinantes de laboratorio de Escherichia coli . [8] Sin embargo, para estudios fisiológicos, se debe desaconsejar el uso de medio LB. [9]
Hay varias formulaciones comunes de LB. Aunque son diferentes, generalmente comparten una composición algo similar de ingredientes utilizados para promover el crecimiento, incluidos los siguientes:
- Péptidos y peptonas de caseína
- Vitaminas (incluidas las vitaminas B)
- Oligoelementos (por ejemplo, nitrógeno, azufre, magnesio)
- Minerales
Los iones de sodio para el transporte y el equilibrio osmótico son proporcionados por el cloruro de sodio . La triptona se usa para proporcionar aminoácidos esenciales como péptidos y peptonas a las bacterias en crecimiento, mientras que el extracto de levadura se usa para proporcionar una gran cantidad de compuestos orgánicos útiles para el crecimiento bacteriano. Estos compuestos incluyen vitaminas y ciertos oligoelementos.
En su artículo original de 1951, Bertani usó 10 gramos de NaCl y 1 gramo de glucosa por 1 L de solución; Luria en su "caldo L" de 1957 copió exactamente la receta original de Bertani. [6] Las recetas que se publicaron más tarde generalmente han omitido la glucosa.
Fórmulas
Las formulaciones generalmente difieren en la cantidad de cloruro de sodio, proporcionando así la selección de las condiciones osmóticas apropiadas para la cepa bacteriana particular y las condiciones de cultivo deseadas. Las formulaciones bajas en sal, Lennox y Luria, son ideales para cultivos que requieren antibióticos sensibles a la sal.
- LB-Miller (10 g / L de NaCl)
- LB-Lennox (5 g / L de NaCl)
- LB-Luria (0,5 g / L de NaCl)
Preparación
El siguiente es un método común para la preparación de 1 litro de LB:
- Mide lo siguiente:
- 10 g de triptona
- 5 g de extracto de levadura
- 10 g de NaCl
- Suspenda los sólidos en ~ 800 ml de agua destilada o desionizada.
- Agregue más agua destilada o agua desionizada , en un cilindro de medición para garantizar la precisión, para hacer un total de 1 litro.
- Esterilice en autoclave a 121 ° C durante 20 minutos.
- Después de enfriar, agite el matraz para asegurar que se mezcle y el LB estará listo para usar.
Ajustar el pH
Antes de la esterilización en autoclave, algunos laboratorios ajustan el pH de LB a 7.5 u 8 con hidróxido de sodio. Sin embargo, el hidróxido de sodio no proporciona ninguna capacidad tamponadora al medio, y esto da como resultado cambios rápidos en el pH durante el cultivo de bacterias. Para evitar esto, algunos laboratorios prefieren ajustar el pH con tampón TRIS 5-10 mmol / L , diluido de 1 mol / L TRIS stock al pH deseado. Sin embargo, no es absolutamente necesario ajustar el pH en la mayoría de situaciones. Algunos laboratorios ajustan el pH a 7.0 simplemente como precaución.
Dado que el tampón con TRIS también será en gran medida ineficaz frente a un crecimiento bacteriano sustancial, normalmente no es necesario ajustar el pH de LB de esta manera particular. Como tal, el uso de TRIS en algunas recetas de caldo (especialmente cuando el cultivo se almacenará a temperatura ambiente durante períodos prolongados) puede considerarse un procedimiento supersticioso sin mucho mérito científico.
Ver también
- placa de agar
- Salvador Luria
- Medio SOC: otro medio ampliamente utilizado para el cultivo de Escherichia coli en trabajos de biología molecular.
Referencias
- ↑ a b Bertani, G. (2004). "Lisogenia a mediados del siglo XX: P1, P2 y otros sistemas experimentales" . Revista de bacteriología . 186 (3): 595–600. doi : 10.1128 / JB.186.3.595-600.2004 . PMC 321500 . PMID 14729683 .
- ^ Bertani, G (1951). "Estudios sobre lisogénesis. I. El modo de liberación de fagos por Escherichia coli lisogénica" . J. Bacteriol . 62 (3): 293–300. PMC 386127 . PMID 14888646 .
- ^ Miller, JH (1972). Experimentos en genética molecular. Laboratorio Cold Spring Harbor, Cold Spring Harbor, Nueva York.
- ^ Luria, SE; Adams, JN; Ting, RC (1960). "Transducción de la capacidad de utilizar lactosa entre la cepa de E. coli y S. dysenteriae y las propiedades de las partículas de fagos transductores". Virología . 12 (3): 348–390. doi : 10.1016 / 0042-6822 (60) 90161-6 . PMID 13764402 .
- ^ Lennox, ES (1955). "Transducción de caracteres genéticos vinculados del huésped por bacteriófago P1". Virología . 1 (2): 190–206. doi : 10.1016 / 0042-6822 (55) 90016-7 . PMID 13267987 .
- ^ a b Luria, SE; Burrous, JW (1957). "Hibridación entre Escherichia coli y Shigella" . J. Bacteriol . 74 (4): 461–476. PMC 289941 . PMID 13475269 .
- ^ Anderson, EH (1946). "Requisito de crecimiento de mutantes resistentes a virus de la cepa B de Escherichia coli" . Proc. Natl. Acad. Sci. USA . 32 (5): 120-128. doi : 10.1073 / pnas.32.5.120 . PMC 1078898 . PMID 16588724 .
- ^ Sambrook, J., EF Fritsch y T. Maniatis. (1989). Clonación molecular: manual de laboratorio, 2ª edición. Laboratorio Cold Spring Harbor, Cold Spring Harbor, Nueva York.
- ^ Nikaido, H. (2009). Las limitaciones de LB Medium. Pequeñas cosas consideradas - The Microbe Blog. ASM. http://schaechter.asmblog.org/schaechter/2009/11/the-limitations-of-lb-medium.html