El péptido de unión a estreptavidina (SBP) -Tag es una secuencia de 38 aminoácidos que puede modificarse en proteínas recombinantes . Las proteínas recombinantes que contienen SBP-Tag se unen a estreptavidina y esta propiedad puede utilizarse en estrategias específicas de purificación, detección o inmovilización. [ cita requerida ]
El péptido de unión a estreptavidina se descubrió en una biblioteca de siete billones de péptidos generados estocásticamente utilizando la técnica de selección in vitro de visualización de ARNm . La selección se realizó incubando con estreptavidina-agarosa seguido de elución con biotina . [2] Se ha demostrado que el SBP-Tag se une a la estreptavidina con una constante de disociación de equilibrio de 2,5 nM [1] [2] y se eluye fácilmente con biotina en condiciones nativas. [1] [2]
Debido a las suaves condiciones de elución (biotina más tampón de lavado), las proteínas marcadas con SBP se pueden generar en un estado relativamente puro con un solo paso de purificación. [1] [3] [4] Hay varias proteínas de mamíferos relativamente abundantes que se asocian de forma inherente con las matrices IMAC que se unen a la etiqueta de polihistidina más comúnmente utilizada ( etiqueta de His). Por esta razón, los protocolos de purificación que no son IMAC, incluso con SBP-Tag, a menudo se prefieren para proteínas que se expresan en células de mamíferos. [ cita requerida ]
Los complejos de proteínas que interactúan también pueden purificarse usando SBP-Tag porque la elución con biotina permite la recuperación en condiciones en las que los complejos deseados permanecen asociados. Por ejemplo, el Complejo de Condensina fue purificado por Kim et al. [2010] y los complejos con el coactivador transcripcional TAZ fueron purificados por Zhang et al. [2009]. El SBP-Tag también se ha incorporado en varios sistemas de purificación de afinidad en tándem (TAP) en los que se utilizan pasos de purificación sucesivos con múltiples etiquetas, por ejemplo, las proteínas de fusión GFP y los complejos de proteínas BTK se purificaron usando un protocolo TAP con SBP-Tag y el His-Tag, [5][6] Los complejos de HDGF- proteína se purificaron usando un protocolo TAP con el SBP-Tag y con el FLAG-tag [7] y loscomplejos Wnt se purificaron usando un protocolo TAP con el SBP-Tag y con el [Calmodulin-Tag]. [8] TAP se utiliza generalmente con complejos de proteínas y varios estudios informan mejoras significativas en la pureza y el rendimiento cuando los sistemas SBP-Tag TAP se comparan con los sistemas sin SBP-Tag. [9] [10] [11] Los sistemas TAP comerciales que utilizan SBP-Tag incluyen los sistemas TAP para mamíferos y adenovirales Interplay® vendidos por Agilent Technologies , y Sigma-Aldrich vende productos similares. [12]
Se han realizado pruebas de detección de interacciones proteína-proteína biológicamente relevantes utilizando Tandem Affinity Purification (TAP) con SBP-Tag y Protein A , [10] para la interacción proteómica y complejos de factores de transcripción con SBP-Tag y Protein G , [10] [ 13] para proteínas que interactúan con la proteína del virus del dengue DENV-2 NS4A con SBP-Tag y Calmodulin Tag. [14] y para las proteínas que interactúan con la proteína fosfatasa 2A (PP2A) con la etiqueta SBP y la etiqueta de hemaglutinina (HA). [11]
El SBP-Tag también se unirá a los reactivos de estreptavidina o estreptavidina en solución. Las aplicaciones de estas asociaciones de ingeniería incluyen la visualización de proteínas específicas dentro de las células vivas, [15] el seguimiento de la cinética de la traducción de proteínas individuales en un sistema de traducción in vitro, [16] el control de la integración de una proteína de membrana multicapa en el retículo endoplásmico fusionando el SBP-Tag con la secuencia de translocación N-terminal y luego deteniendo la integración con estreptavidina y reiniciando la integración con biotina. [17] [18] Los reactivos de estreptavidina fluorescente (por ejemplo, estreptavidina-HRP) se pueden usar para visualizar la etiqueta SBP mediante inmunotransferencia de SDS-PAGE. [1] [19][20] Además, los anticuerpos contra la etiqueta SBP están disponibles comercialmente. [ cita requerida ]