Un marcador seleccionable es un gen introducido en una célula , especialmente una bacteria o en células en cultivo , que confiere un rasgo adecuado para la selección artificial . Son un tipo de gen indicador que se utiliza en microbiología de laboratorio , biología molecular e ingeniería genética para indicar el éxito de una transfección u otro procedimiento destinado a introducir ADN extraño en una célula. Los marcadores seleccionables suelen ser genes de resistencia a los antibióticos (Un marcador de resistencia a antibióticos es un gen que produce una proteína que proporciona a las células que expresan esta proteína resistencia a un antibiótico. ). Las bacterias que se han sometido a un procedimiento para introducir ADN extraño se cultivan en un medio que contiene un antibiótico, y las colonias bacterianas que pueden crecer han absorbido y expresado con éxito el material genético introducido. Normalmente, los genes que codifican la resistencia a antibióticos tales como ampicilina , cloroanfenicol, tetraciclina o kanamicina, etc., se consideran marcadores seleccionables útiles para E. coli .
Operandos de modus
Los no recombinantes se separan de los recombinantes; es decir, se introduce un ADN-r en bacterias , algunas bacterias se transforman con éxito, algunas permanecen sin transformar. Cuando se cultivan en un medio que contiene ampicilina, las bacterias mueren debido a la falta de resistencia a la ampicilina. La posición se anota más tarde en papel de nitrocelulosa y se separa para moverlos al medio nutritivo para la producción en masa del producto requerido. Una alternativa a un marcador seleccionable es un marcador detectable que también puede denominarse gen indicador , que permite al investigador distinguir entre células deseadas y no deseadas, por ejemplo, entre colonias azules y blancas. Estas células deseadas o no deseadas son simplemente células no transformadas que no pudieron absorber el gen durante el experimento.
Positivo y negativo
Para la investigación en biología molecular, se pueden utilizar diferentes tipos de marcadores en función de la selección buscada. Éstas incluyen:
- Los marcadores positivos o de selección son marcadores seleccionables que confieren una ventaja selectiva al organismo huésped. [1] Un ejemplo sería la resistencia a los antibióticos, que permite que el organismo huésped sobreviva a la selección de antibióticos.
- Los marcadores negativos o contra-seleccionables son marcadores seleccionables que eliminan o inhiben el crecimiento del organismo huésped tras la selección. [2] Un ejemplo sería la timidina quinasa , que hace que el huésped sea sensible a la selección de ganciclovir . [ cita requerida ]
- Los marcadores seleccionables positivos y negativos pueden servir como marcador tanto positivo como negativo al conferir una ventaja al huésped en una condición, pero inhiben el crecimiento en una condición diferente. Un ejemplo sería una enzima que puede complementar una auxotrofia (selección positiva) y poder convertir una sustancia química en un compuesto tóxico (selección negativa). [ cita requerida ]
Ejemplos comunes
Ejemplos de marcadores seleccionables incluyen:
- Beta-lactamasa que confiere resistencia a ampicilina a huéspedes bacterianos.
- Neo gen de Tn5, que confiere resistencia a la kanamicina en bacterias y a la genetina en células eucariotas [3]
- Gen FabI mutante (mFabI) del genoma de E. coli , que confiere resistencia al triclosán al huésped. [4]
- URA3 , una orotidina-5 'fosfato descarboxilasa de levadura es un marcador seleccionable positivo y negativo. Es necesario para la biosíntesis de uracilo y puede complementar a losmutantes de ura3 que son auxotróficos para el uracilo (selección positiva). La enzima URA3 también convierte el ácido 5-fluoroorótico (5FOA) en el compuesto tóxico 5-fluorouracilo , por lo que cualquier célula que lleve elgen URA3 morirá en presencia de 5FOA (selección negativa). [5]
Referencias
- ^ "selección positiva" . Scitable . Naturaleza . Consultado el 29 de septiembre de 2011 .
- ^ "selección negativa" . Scitable . Naturaleza . Consultado el 29 de septiembre de 2011 .
- ^ Callmigration.org: orientación genética
- ^ Jang, Chuan-Wei; Magnuson, Terry (20 de febrero de 2013). "Un marcador de selección novedoso para la clonación y recombinación de ADN eficiente en E. coli" . PLOS ONE . 8 (2): e57075. Código bibliográfico : 2013PLoSO ... 857075J . doi : 10.1371 / journal.pone.0057075 . PMC 3577784 . PMID 23437314 .
- ^ Boeke JD; LaCroute F; Fink GR (1984). "Una selección positiva para mutantes que carecen de actividad orotidina-5'-fosfato descarboxilasa en levadura: resistencia al ácido 5-fluoro-orótico". Mol. Gen. Genet . 197 (2): 345–6. doi : 10.1007 / bf00330984 . PMID 6394957 . S2CID 28881589 .