La terapia génica utiliza el suministro de ADN a las células, lo que se puede lograr mediante varios métodos, que se resumen a continuación. Las dos clases principales de métodos son los que usan virus recombinantes (a veces llamados nanopartículas biológicas o vectores virales) y los que usan ADN desnudo o complejos de ADN (métodos no virales).
Virus
Todos los virus se unen a sus huéspedes e introducen su material genético en la célula huésped como parte de su ciclo de replicación. Este material genético contiene "instrucciones" básicas sobre cómo producir más copias de estos virus, pirateando la maquinaria de producción normal del cuerpo para satisfacer las necesidades del virus. La célula huésped seguirá estas instrucciones y producirá copias adicionales del virus, lo que provocará que más y más células se infecten. Algunos tipos de virus insertan su genoma en el citoplasma del huésped, pero en realidad no ingresan a la célula. Otros penetran en la membrana celular disfrazados de moléculas de proteína y entran en la célula.
Hay dos tipos principales de infección por virus: lítica y lisogénica . Poco después de insertar su ADN, los virus del ciclo lítico producen rápidamente más virus, salen de la célula e infectan más células. Los virus lisogénicos integran su ADN en el ADN de la célula huésped y pueden vivir en el cuerpo durante muchos años antes de responder a un desencadenante. El virus se reproduce como lo hace la célula y no causa daño corporal hasta que se activa. El disparador libera el ADN del anfitrión y lo emplea para crear nuevos virus. [ cita requerida ]
Retrovirus
El material genético de los retrovirus está en forma de moléculas de ARN , mientras que el material genético de sus huéspedes está en forma de ADN. Cuando un retrovirus infecta una célula huésped, introducirá su ARN junto con algunas enzimas, a saber, transcriptasa inversa e integrasa , en la célula. Esta molécula de ARN del retrovirus debe producir una copia de ADN de su molécula de ARN antes de que pueda integrarse en el material genético de la célula huésped. El proceso de producir una copia de ADN a partir de una molécula de ARN se denomina transcripción inversa . Es llevada a cabo por una de las enzimas transportadas en el virus, llamada transcriptasa inversa . Una vez que se produce esta copia de ADN y está libre en el núcleo de la célula huésped, debe incorporarse al genoma de la célula huésped. Es decir, debe insertarse en las grandes moléculas de ADN de la célula (los cromosomas). Este proceso lo realiza otra enzima transportada en el virus llamada integrasa . [ cita requerida ]
Ahora que se ha insertado el material genético del virus, se puede decir que la célula huésped se ha modificado para contener nuevos genes. Si esta célula huésped se divide más tarde, todos sus descendientes contendrán los nuevos genes. A veces, los genes del retrovirus no expresan su información de inmediato. [ cita requerida ]
Uno de los problemas de la terapia génica con retrovirus es que la enzima integrasa puede insertar el material genético del virus en cualquier posición arbitraria del genoma del huésped; inserta aleatoriamente el material genético en un cromosoma. Si se inserta material genético en medio de uno de los genes originales de la célula huésped, este gen se alterará ( mutagénesis por inserción ). Si el gen es uno que regula la división celular, puede ocurrir una división celular descontrolada (es decir, cáncer ). Este problema ha comenzado a abordarse recientemente mediante la utilización de nucleasas con dedos de zinc [1] o mediante la inclusión de ciertas secuencias, como la región de control del locus de beta-globina, para dirigir el sitio de integración a sitios cromosómicos específicos.
Los ensayos de terapia génica que utilizan vectores retrovirales para tratar la inmunodeficiencia combinada grave ligada al cromosoma X (X-SCID) representan la aplicación más exitosa de la terapia génica hasta la fecha. Más de veinte pacientes han sido tratados en Francia y Gran Bretaña, observándose una alta tasa de reconstitución del sistema inmunológico. Ensayos similares se restringieron o detuvieron en los EE. UU. Cuando se informó leucemia en pacientes tratados en el ensayo francés de terapia génica X-SCID. [2] Hasta la fecha, cuatro niños en el ensayo francés y uno en el ensayo británico han desarrollado leucemia como resultado de mutagénesis de inserción por el vector retroviral. Todos menos uno de estos niños respondieron bien al tratamiento convencional contra la leucemia. Los ensayos de terapia génica para tratar la SCID debido a la deficiencia de la enzima adenosina desaminasa ( ADA ) (una forma de SCID) [3] continúan con relativo éxito en los EE.UU., Gran Bretaña, Irlanda, Italia y Japón. [ cita requerida ]
Adenovirus
Los adenovirus son virus que llevan su material genético en forma de ADN bicatenario. Causan infecciones respiratorias, intestinales y oculares en humanos (especialmente el resfriado común). Cuando estos virus infectan una célula huésped, introducen su molécula de ADN en el huésped. El material genético de los adenovirus no se incorpora (es transitorio) al material genético de la célula huésped. La molécula de ADN se deja libre en el núcleo de la célula huésped y las instrucciones en esta molécula de ADN adicional se transcriben como cualquier otro gen. La única diferencia es que estos genes adicionales no se replican cuando la célula está a punto de someterse a la división celular, por lo que los descendientes de esa célula no tendrán el gen adicional. [ cita requerida ]
Como resultado, el tratamiento con el adenovirus requerirá la readministración en una población de células en crecimiento, aunque la ausencia de integración en el genoma de la célula huésped debería prevenir el tipo de cáncer observado en los ensayos de SCID. Este sistema de vector se ha promovido para el tratamiento del cáncer y, de hecho, el primer producto de terapia génica con licencia para tratar el cáncer, Gendicine , es un adenovirus. La gendicina, una terapia génica adenoviral basada en p53 , fue aprobada por los reguladores chinos de alimentos y medicamentos en 2003 para el tratamiento del cáncer de cabeza y cuello. La advexina, un enfoque de terapia génica similar de Introgen, fue rechazado por la Administración de Drogas y Alimentos de los Estados Unidos (FDA) en 2008. [ cita requerida ]
Las preocupaciones sobre la seguridad de los vectores de adenovirus surgieron después de la muerte de Jesse Gelsinger en 1999 mientras participaba en un ensayo de terapia génica. Desde entonces, el trabajo con vectores de adenovirus se ha centrado en versiones genéticamente lisiadas del virus. [ cita requerida ]
Seudotipado de proteínas de envoltura de vectores virales
Los vectores virales descritos anteriormente tienen poblaciones de células huésped naturales que infectan de manera más eficiente. Los retrovirus tienen rangos de células huésped naturales limitados, y aunque los adenovirus y los virus adenoasociados pueden infectar un rango relativamente más amplio de células de manera eficiente, algunos tipos de células también son resistentes a la infección por estos virus. La unión y la entrada a una célula susceptible está mediada por la envoltura de proteína en la superficie de un virus. Los retrovirus y los virus adenoasociados tienen una sola proteína que recubre su membrana, mientras que los adenovirus están recubiertos con una proteína de envoltura y fibras que se extienden desde la superficie del virus. Las proteínas de la envoltura de cada uno de estos virus se unen a moléculas de la superficie celular como el sulfato de heparina , que las localiza en la superficie del huésped potencial, así como con el receptor de proteína específico que induce cambios estructurales que promueven la entrada en la proteína viral. , o localiza el virus en endosomas donde la acidificación del lumen induce este replegamiento de la cubierta viral . En cualquier caso, la entrada en células hospedadoras potenciales requiere una interacción favorable entre una proteína en la superficie del virus y una proteína en la superficie de la célula. [ cita requerida ]
Para los propósitos de la terapia génica, uno podría querer limitar o expandir el rango de células susceptibles de transducción por un vector de terapia génica. Con este fin, se han desarrollado muchos vectores en los que las proteínas de la envoltura viral endógenas han sido reemplazadas por proteínas de la envoltura de otros virus o por proteínas quiméricas. Dicha quimera consistiría en aquellas partes de la proteína viral necesarias para la incorporación en el virión, así como en secuencias destinadas a interactuar con proteínas específicas de la célula huésped. Los virus en los que se han reemplazado las proteínas de la envoltura como se describe se denominan virus pseudotipados . Por ejemplo, el vector retroviral más popular para su uso en ensayos de terapia génica ha sido el virus de inmunodeficiencia de simios lentivirus recubierto con las proteínas de la envoltura, proteína G , del virus de la estomatitis vesicular . Este vector se denomina lentivirus pseudotipado VSV G e infecta un conjunto de células casi universal. Este tropismo es característico de la proteína G del VSV con la que está recubierto este vector. Se han realizado muchos intentos para limitar el tropismo de los vectores virales a una o unas pocas poblaciones de células huésped. Este avance permitiría la administración sistémica de una cantidad relativamente pequeña de vector. El potencial de modificación de células fuera del objetivo sería limitado y muchas preocupaciones de la comunidad médica se aliviarían. La mayoría de los intentos de limitar el tropismo han utilizado proteínas de envoltura quiméricas que llevan fragmentos de anticuerpos . Estos vectores son muy prometedores para el desarrollo de terapias genéticas "mágicas". [ cita requerida ]
Vectores competentes en replicación
Un vector competente en replicación llamado ONYX-015 se usa en la replicación de células tumorales. Se encontró que en ausencia de la proteína viral E1B-55Kd, el adenovirus provocó una apoptosis muy rápida de las células p53 (+) infectadas, y esto da como resultado una progenie de virus drásticamente reducida y ninguna propagación posterior. La apoptosis fue principalmente el resultado de la capacidad del EIA para inactivar p300. En las células p53 (-), la deleción de E1B 55kd no tiene consecuencias en términos de apoptosis, y la replicación viral es similar a la del virus de tipo salvaje, lo que resulta en una destrucción masiva de las células. [ cita requerida ]
Un vector de replicación defectuosa elimina algunos genes esenciales. Estos genes eliminados siguen siendo necesarios en el cuerpo, por lo que se reemplazan con un virus auxiliar o una molécula de ADN. [4]
Elementos cis y trans que actúan
Los vectores de replicación defectuosa siempre contienen una "construcción de transferencia". La construcción de transferencia lleva el gen a transducir o "transgén". La construcción de transferencia también lleva las secuencias que son necesarias para el funcionamiento general del genoma viral: secuencia de empaquetamiento, repeticiones para la replicación y, cuando sea necesario, cebado de la transcripción inversa. Estos se denominan elementos que actúan en cis, porque deben estar en el mismo fragmento de ADN que el genoma viral y el gen de interés. Los elementos que actúan en trans son elementos virales que pueden codificarse en una molécula de ADN diferente. Por ejemplo, las proteínas estructurales virales pueden expresarse a partir de un elemento genético diferente al del genoma viral. [4]
Virus del herpes simple
El virus del herpes simple es un virus neurotrópico humano. Esto se examina principalmente para determinar la transferencia de genes en el sistema nervioso. El virus HSV-1 de tipo salvaje es capaz de infectar neuronas y evadir la respuesta inmune del huésped, pero aún puede reactivarse y producir un ciclo lítico de replicación viral. Por lo tanto, es típico usar cepas mutantes de HSV-1 que son deficientes en su capacidad de replicarse. Aunque el virus latente no es transcripcionalmente aparente, posee promotores neuronales específicos que pueden continuar funcionando normalmente. [ se necesitan más explicaciones ] Los anticuerpos contra el VHS-1 son comunes en los seres humanos, sin embargo, las complicaciones debidas a la infección por herpes son algo raras. [5] Se debe tener precaución con los casos raros de encefalitis y esto proporciona una justificación para usar el VHS-2 como vector viral, ya que generalmente tiene tropismo para las células neuronales que inervan el área urogenital del cuerpo y podría evitarle a la multitud una patología grave. en el cerebro. [ cita requerida ]
Métodos no virales
Los métodos no virales presentan ciertas ventajas sobre los métodos virales, siendo solo dos la producción simple a gran escala y la baja inmunogenicidad del huésped. Anteriormente, los bajos niveles de transfección y expresión del gen mantenían en desventaja a los métodos no virales; sin embargo, los avances recientes en la tecnología de vectores han producido moléculas y técnicas con eficiencias de transfección similares a las de los virus. [6]
Inyección de ADN desnudo
Este es el método más simple de transfección no viral. Los ensayos clínicos llevados a cabo con inyección intramuscular de un plásmido de ADN desnudo se han realizado con cierto éxito; sin embargo, la expresión ha sido muy baja en comparación con otros métodos de transfección. Además de los ensayos con plásmidos, se han realizado ensayos con producto de PCR desnudo , que han tenido un éxito similar o mayor. La captación celular de ADN desnudo es generalmente ineficaz. Los esfuerzos de investigación centrados en mejorar la eficiencia de la captación de ADN desnudo han producido varios métodos nuevos, como la electroporación , la sonoporación y el uso de una " pistola de genes ", que dispara partículas de oro recubiertas de ADN en la célula utilizando gas a alta presión. [7]
Métodos físicos para mejorar el parto.
Electroporación
La electroporación es un método que utiliza pulsos cortos de alto voltaje para transportar el ADN a través de la membrana celular. Se cree que este choque causa la formación temporal de poros en la membrana celular, permitiendo el paso de las moléculas de ADN. La electroporación es generalmente eficiente y funciona en una amplia gama de tipos de células. Sin embargo, una alta tasa de muerte celular después de la electroporación ha limitado su uso, incluidas las aplicaciones clínicas.
Más recientemente, se ha utilizado en experimentos de terapia génica un método más nuevo de electroporación, denominado transfección por avalancha de electrones. Mediante el uso de una descarga de plasma de alto voltaje, el ADN se entregó de manera eficiente siguiendo pulsos muy cortos (microsegundos). En comparación con la electroporación, la técnica resultó en una eficiencia mucho mayor y menos daño celular.
Pistola de genes
El uso del bombardeo de partículas, o la pistola de genes , es otro método físico de transfección de ADN. En esta técnica, el ADN se recubre sobre partículas de oro y se carga en un dispositivo que genera una fuerza para lograr la penetración del ADN en las células, dejando el oro en un disco de "detención".
Sonoporación
La sonoporación utiliza frecuencias ultrasónicas para transportar ADN a las células. Se cree que el proceso de cavitación acústica interrumpe la membrana celular y permite que el ADN se mueva hacia las células.
Magnetofección
En un método denominado magnetofección , el ADN se compleja con partículas magnéticas y se coloca un imán debajo de la placa de cultivo de tejidos para poner los complejos de ADN en contacto con una monocapa celular.
Entrega hidrodinámica
La administración hidrodinámica implica la inyección rápida de un gran volumen de una solución en la vasculatura (como en la vena cava inferior , el conducto biliar o la vena de la cola ). La solución contiene moléculas que deben insertarse en las células, como plásmidos de ADN o ARNip , y la transferencia de estas moléculas a las células es asistida por la presión hidrostática elevada causada por el alto volumen de solución inyectada. [8] [9] [10]
Métodos químicos para mejorar la entrega
Oligonucleótidos
El uso de oligonucleótidos sintéticos en terapia génica tiene como objetivo desactivar los genes implicados en el proceso de la enfermedad. Hay varios métodos por los cuales esto se logra. Una estrategia utiliza antisentido específico del gen objetivo para interrumpir la transcripción del gen defectuoso. Otro utiliza pequeñas moléculas de ARN llamadas ARNip para indicar a la célula que escinda secuencias únicas específicas en la transcripción del ARNm del gen defectuoso, interrumpiendo la traducción del ARNm defectuoso y, por lo tanto, la expresión del gen. Una estrategia adicional utiliza oligodesoxinucleótidos bicatenarios como señuelo para los factores de transcripción que se requieren para activar la transcripción del gen diana. Los factores de transcripción se unen a los señuelos en lugar del promotor del gen defectuoso, lo que reduce la transcripción del gen diana y reduce la expresión. Además, se han utilizado oligonucleótidos de ADN monocatenario para dirigir un cambio de base única dentro de un gen mutante. El oligonucleótido está diseñado para aparearse con complementariedad con el gen diana con la excepción de una base central, la base diana, que sirve como base molde para la reparación. Esta técnica se conoce como reparación génica mediada por oligonucleótidos, reparación génica dirigida o alteración de nucleótidos dirigida.
Lipoplejos
Para mejorar la entrega del nuevo ADN a la célula, el ADN debe protegerse contra daños y cargarse positivamente. Inicialmente, se utilizaron lípidos aniónicos y neutros para la construcción de lipoplejos para vectores sintéticos. Sin embargo, a pesar de que existe poca toxicidad asociada a ellos, que son compatibles con los fluidos corporales y que existe la posibilidad de adaptarlos para que sean específicos de tejido; su producción es complicada y requiere mucho tiempo, por lo que la atención se centró en las versiones catiónicas.
Los lípidos catiónicos , debido a su carga positiva, se utilizaron por primera vez para condensar moléculas de ADN cargadas negativamente con el fin de facilitar la encapsulación de ADN en liposomas. Posteriormente se descubrió que el uso de lípidos catiónicos mejoraba significativamente la estabilidad de los lipoplejos. También como resultado de su carga, los liposomas catiónicos interactúan con la membrana celular, se creía ampliamente que la endocitosis era la ruta principal por la cual las células captan los lipoplejos. Los endosomas se forman como resultado de la endocitosis; sin embargo, si los genes no pueden liberarse en el citoplasma al romper la membrana del endosoma, se enviarán a los lisosomas donde se destruirá todo el ADN antes de que puedan lograr sus funciones. También se encontró que aunque los propios lípidos catiónicos podrían condensar y encapsular el ADN en liposomas, la eficiencia de transfección es muy baja debido a la falta de capacidad en términos de "escape endosómico". Sin embargo, cuando se añadieron lípidos auxiliares (normalmente lípidos electroneutrales, como DOPE) para formar lipoplejos, se observó una eficacia de transfección mucho mayor. Más tarde, se descubrió que ciertos lípidos tienen la capacidad de desestabilizar las membranas endosomales para facilitar el escape del ADN del endosoma, por lo que esos lípidos se denominan lípidos fusogénicos. Aunque los liposomas catiónicos se han utilizado ampliamente como una alternativa para los vectores de administración de genes, también se observó una toxicidad dependiente de la dosis de los lípidos catiónicos que podría limitar sus usos terapéuticos. [11]
El uso más común de los lipoplexos ha sido en la transferencia de genes a las células cancerosas, donde los genes suministrados han activado genes de control supresores de tumores en la célula y disminuyen la actividad de los oncogenes. Estudios recientes han demostrado que los lipoplejos son útiles para transfectar células epiteliales respiratorias .
Polimerosomas
Los polimerosomas son versiones sintéticas de liposomas ( vesículas con una bicapa lipídica ), hechas de copolímeros de bloque anfifílicos . Pueden encapsular contenidos hidrófilos o hidrófobos y se pueden utilizar para transportar cargas como ADN, proteínas o fármacos a las células. Las ventajas de los polimerosomas sobre los liposomas incluyen una mayor estabilidad, resistencia mecánica, tiempo de circulación sanguínea y capacidad de almacenamiento. [12] [13] [14]
Polyplexes
Los complejos de polímeros con ADN se denominan poliplexos. [15] La mayoría de los polyplex consisten en polímeros catiónicos y su fabricación se basa en el autoensamblaje mediante interacciones iónicas. Una diferencia importante entre los métodos de acción de los polyplexes y los lipoplexes es que los polyplexes no pueden liberar directamente su carga de ADN en el citoplasma. Como resultado, se requirió la cotransfección con agentes endosoma-líticos como el adenovirus inactivado para facilitar el escape de las nanopartículas de la vesícula endocítica producida durante la captación de partículas. Sin embargo, una mejor comprensión de los mecanismos por los cuales el ADN puede escapar de la vía endolisosómica, es decir, el efecto de esponja de protones, [16] ha desencadenado nuevas estrategias de síntesis de polímeros como la incorporación de residuos protonables en la cadena principal del polímero y ha revitalizado la investigación sobre sistemas basados en policatión. [17]
Debido a su baja toxicidad, alta capacidad de carga y facilidad de fabricación, los nanoportadores policatiónicos demuestran ser muy prometedores en comparación con sus rivales, como los vectores virales que muestran una alta inmunogenicidad y carcinogenicidad potencial, y los vectores basados en lípidos que causan toxicidad por dependencia de la dosis. La polietilenimina [18] y el quitosano se encuentran entre los portadores poliméricos que se han estudiado ampliamente para el desarrollo de terapias de liberación de genes. Otros portadores policatiónicos como poli (beta-amino ésteres) [19] y polifosforamidato [20] se están agregando a la biblioteca de portadores de genes potenciales. Además de la variedad de polímeros y copolímeros, la facilidad para controlar el tamaño, la forma y la química de la superficie de estos nanoportadores poliméricos les da una ventaja en la capacidad de focalización y el aprovechamiento de la permeabilidad mejorada y el efecto de retención. [21]
Dendrímeros
Un dendrímero es una macromolécula muy ramificada con forma esférica. La superficie de la partícula se puede funcionalizar de muchas formas y muchas de las propiedades de la construcción resultante están determinadas por su superficie.
En particular, es posible construir un dendrímero catiónico, es decir, uno con una carga superficial positiva. Cuando está en presencia de material genético como ADN o ARN, la complementariedad de carga conduce a una asociación temporal del ácido nucleico con el dendrímero catiónico. Al llegar a su destino, el complejo dendrímero-ácido nucleico se introduce en la célula mediante endocitosis.
En los últimos años, el punto de referencia para los agentes de transfección han sido los lípidos catiónicos. Se ha informado que las limitaciones de estos reactivos competidores incluyen: la falta de capacidad para transfectar algunos tipos de células, la falta de capacidades sólidas de focalización activa, la incompatibilidad con modelos animales y la toxicidad. Los dendrímeros ofrecen una construcción covalente robusta y un control extremo sobre la estructura de la molécula y, por lo tanto, el tamaño. Juntos, estos brindan ventajas convincentes en comparación con los enfoques existentes.
La producción de dendrímeros ha sido históricamente un proceso lento y costoso que consta de numerosas reacciones lentas, un obstáculo que restringió severamente su desarrollo comercial. La empresa Dendritic Nanotechnologies, con sede en Michigan, descubrió un método para producir dendrímeros utilizando química impulsada cinéticamente, un proceso que no solo redujo el costo en una magnitud de tres, sino que también redujo el tiempo de reacción de más de un mes a varios días. Estos nuevos dendrímeros "Priostar" pueden construirse específicamente para transportar una carga útil de ADN o ARN que transfecta las células con una alta eficiencia con poca o ninguna toxicidad. [ cita requerida ]
Nanopartículas inorgánicas
Se ha demostrado que las nanopartículas inorgánicas, como el oro , la sílice , el óxido de hierro (por ejemplo, magnetofección ) y los fosfatos de calcio, son capaces de administrar genes. [22] Algunos de los beneficios de los vectores inorgánicos se encuentran en su estabilidad de almacenamiento, bajo costo de fabricación y, a menudo, en tiempo, baja inmunogenicidad y resistencia al ataque microbiano. Se ha demostrado que los materiales nanométricos de menos de 100 nm atrapan de manera eficiente el ADN o ARN y permiten su escape del endosoma sin degradación. También se ha demostrado que los inorgánicos exhiben una transfección in vitro mejorada para las líneas celulares unidas debido a su mayor densidad y ubicación preferencial en la base de la placa de cultivo. Los puntos cuánticos también se han utilizado con éxito y permiten el acoplamiento de la terapia génica con un marcador de fluorescencia estable. También se están desarrollando nanopartículas orgánicas diseñadas, que podrían usarse para la entrega conjunta de genes y agentes terapéuticos. [23]
Péptidos penetrantes en las células
Los péptidos penetrantes en las células (CPP), también conocidos como dominios de transducción de péptidos (PTD), son péptidos cortos (<40 aminoácidos) que atraviesan de manera eficiente las membranas celulares mientras se unen covalente o no covalentemente a varias moléculas, facilitando así estas moléculas ' entrada en celdas. La entrada celular se produce principalmente por endocitosis, pero también existen otros mecanismos de entrada. Los ejemplos de moléculas de carga de CPP incluyen ácidos nucleicos , liposomas y fármacos de bajo peso molecular. [24] [25]
La carga de CPP se puede dirigir a orgánulos celulares específicos incorporando secuencias de localización en secuencias de CPP. Por ejemplo, las secuencias de localización nuclear se utilizan comúnmente para guiar la carga de CPP hacia el núcleo. [26] Para guiarse en las mitocondrias, se puede usar una secuencia de direccionamiento mitocondrial ; este método se utiliza en la protofección (una técnica que permite insertar ADN mitocondrial extraño en las mitocondrias de las células). [27] [28]
Métodos híbridos
Debido a que todos los métodos de transferencia de genes tienen deficiencias, se han desarrollado algunos métodos híbridos que combinan dos o más técnicas. Los virosomas son un ejemplo; combinan liposomas con un virus de influenza o VIH inactivado . Se ha demostrado que esto tiene una transferencia de genes más eficaz en las células epiteliales respiratorias que los métodos virales o liposomales solos. Otros métodos implican mezclar otros vectores virales con lípidos catiónicos o virus de hibridación . [29]
Ver también
- Genosoma (lipoplex)
- Técnicas de ingeniería genética
- Transformación
- Transfección
- Transducción
Referencias
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